[發明專利]用于檢測非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物組、試劑盒、方法和應用

在審

• 申請號: 202011101785.3
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112094950A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 田星;陳芝娟;王虹軍;賀賢漢
• 申請（專利權）人: 杭州博日科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

1.一種用于檢測非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物組，其特征在于，包括用于檢測VP72基因的引物、用于檢測MGF360-14L基因的引物和用于檢測CD2V基因的引物：

所述用于檢測VP72基因的引物具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或與SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于檢測MGF360-14L基因的引物具有如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，或與SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于檢測CD2V基因的引物具有如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，或與SEQ ID NO.7和/或SEQ ID NO.8具有至少85％同一性的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述引物組還包括用于檢測VP72基因的探針、用于檢測MGF360-14L基因的探針和用于檢測CD2V基因的探針；

所述用于檢測VP72基因的探針具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，或與SEQ IDNO.3具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于檢測MGF360-14L基因的探針具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，或與SEQID NO.6具有至少85％同一性的核苷酸序列；

所述用于檢測CD2V基因的探針具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，或與SEQ IDNO.9具有至少85％同一性的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的引物組，其特征在于，用于檢測VP72基因的探針、用于檢測MGF360-14L基因的探針和用于檢測CD2V基因的探針的兩端均獨立地分別含有熒光淬滅基團和互不相同的熒光報告基團；

優選地，所述熒光報告基團包括FAM、HEX或ROX；用于檢測VP72基因的探針優選含有FAM，用于檢測MGF360-14L基因的探針優選含有HEX，用于檢測CD2V基因的探針優選含有ROX；

優選地，所述熒光淬滅基團包括BHQ1或BHQ2。

4.一種用于檢測非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1-3任一項所述的引物組。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和/或陰性對照品。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品包括含有部分或全部VP72基因的質粒、含有部分或全部MGF360-14L基因的質粒和含有部分或全部CD2V基因的質粒；

優選地，所述陰性對照品包括用于稀釋陽性對照品的溶液，優選為TE溶液。

7.一種用于檢測非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株的方法，其特征在于，以待測樣本的基因組DNA為模板，使用權利要求1-3任一項所述的引物組或權利要求4-6任一項所述的試劑盒進行PCR反應，根據擴增產物中含有的特異性片段或擴增曲線，判斷待測樣品是否含有非洲豬瘟病毒野毒株或基因缺失株：

若擴增產物中同時含有VP72基因、MGF360-14L基因及CD2V基因的特異性片段或擴增曲線，則待測樣本中包含非洲豬瘟病毒野毒株；若擴增產物中同時不含有VP72基因、MGF360-14L基因及CD2V基因的特異性片段或擴增曲線，則待測樣本中不包含非洲豬瘟病毒野毒株和基因缺失株；若擴增產物中含有VP72基因的特異性片段或擴增曲線，同時不含有MGF360-14L基因及CD2V基因的特異性片段或擴增曲線，則待測樣本中含有MGF360-505R及CD2V雙基因缺失株；若擴增產物中含有VP72基因和MGF360-14L基因的特異性片段或擴增曲線，同時不含有CD2V基因的特異性片段或擴增曲線，則待測樣本中含有CD2V基因缺失株；若擴增產物中含有VP72基因和CD2V基因的特異性片段或擴增曲線，同時不含有MGF360-14L基因的特異性片段或擴增曲線，則待測樣本中含有MGF360-505R單基因缺失株。