[發明專利]一種雞傳染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其應用

有效

• 申請號: 202011099954.4
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112159480B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 吳異健;陳強;劉珍妮;李明慧;廖呂燕;李娜
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/70;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明提供的是一種雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）多抗原表位蛋白及其應用，所述蛋白其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本申請將雞免疫球蛋白IgG重鏈部分恒定區（γCH）作為多表位融合蛋白的載體蛋白，將IBDV代表性毒株VP2和VP3上的B細胞表位和T細胞表位基因進行串聯合成后與γCH編碼基因相連接，構建重組質粒pET?VP₂₊₃?γCH，并轉化至大腸桿菌BL21中進行表達。重組多抗原表位融合蛋白pVP₂₊₃?γCH經過純化和鑒定后通過SPF雞進行的免疫攻毒保護試驗，初步顯示出了良好的免疫保護效果。本研究成功構建和表達重組多抗原表位蛋白pVP₂₊₃?γCH，為IBDV多表位疫苗的研發奠定基礎。

技術領域

本發明涉及一種雞傳染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

目前，臨床上使用的畜禽病毒病疫苗主要是弱毒苗和滅活苗。弱毒苗在臨床應用中可能會存在毒株返強以及疫苗株與野生型毒株基因重組等安全性問題。而滅活苗更傾向于誘導體液免疫，其誘導細胞免疫的能力相對較弱。一個理想的疫苗除應具有安全性之外，還應同時誘導機體的特異性體液免疫和細胞免疫。通過誘導體液免疫產生高親和力中和抗體，阻止病毒與靶細胞受體的結合。而誘導細胞免疫則產生特異性細胞毒性T細胞(CTL)，CTL識別靶細胞后能夠直接裂解靶細胞或者誘導靶細胞的凋亡，從而抑制病毒在體內的復制。除了常規的滅活苗和弱毒苗，目前研究的較多的亞單位疫苗和DNA疫苗。這幾種新型疫苗有較多優點，但也存在一些不足的地方。亞單位疫苗一般通過生物技術手段直接得到較純的病毒主要中和抗原，免疫動物后能直接迅速誘導機體產生大量的中和抗體。亞單位疫苗存在的不足是以目前的技術手段想要得到很純的亞單位蛋白成本相對比較高昂，而亞單位蛋白純度不夠臨床免疫效果也受影響。有關DNA疫苗研究已有很多年，傳統的DNA疫苗是將病原的主要抗原的基因克隆到真核表達質粒上，通過重組的真核質粒對動物進行免疫，免疫后外源的病毒蛋白可在動物體內表達，作為動物機體來說外源蛋白的表達將會刺激機體產生免疫應答，產生相應的抗體，從而保護機體。但是DNA疫苗還有許多不足，主要是真核表達質粒在動物機體表達外源蛋白不容易，即使表達有蛋白但是表達的蛋白能否引起機體免疫應答也是其中一個問題；同時大量提純質粒成本還是比較高昂，不易實現大規模的應用。多表位疫苗是近年發展起來的一種基于目標抗原表位設計的新型疫苗，相對于傳統弱毒疫苗，其安全性更高。將病毒蛋白上的多個B細胞或T細胞表位整合到特定載體上構建的多表位疫苗能夠有效刺激機體產生針對多個表位的B細胞或T細胞克隆，從而有利于控制病毒的感染。多表位疫苗在抑制病毒復制和對抗免疫逃逸株等方面都具有獨特優勢，是目前疫苗研究的一個熱點。

臨床常用的IBD疫苗主要是滅活苗和弱毒苗，滅活苗主要是通過擴增病毒后經過滅活使病毒失去致病型但仍有免疫原性而能夠誘發雞產生相應的抗體；弱毒苗是通過不斷的傳代使病毒逐漸失去原有的毒力以及高致病性，能導致雞發生免疫反應而提高抗體水平又不會使雞嚴重感染和發病。這兩種疫苗臨床效果一直都比較良好，基本可以控制預防IBD的發生，IBD的爆發因此而相對被控制。不過值得注意的是雖然常規疫苗可以一定程度上抑制疾病的發生，但是現在有一些關于免疫失敗的報道，接種過IBDV疫苗的雞場因免疫失敗而爆發此病。這其中導致免疫失敗的原因很多，而病毒本身與疫苗株差異直接導致了免疫接種產生的抗體無法抵抗病毒的攻擊是免疫失敗的主要原因。IBDV容易發生變異，許多免疫失敗的報道表明對新型疫苗的研究刻不容緩。本發明構建表達了以雞免疫球蛋白IgG重鏈部分恒定區為載體蛋白的包含IBDV代表性毒株VP2和VP3上的B細胞表位和T細胞表位的重組多抗原表位融合蛋白pVP₂₊₃-γCH，該蛋白免疫保護效果，為 IBDV多表位疫苗的研發奠定基礎。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雞傳染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白及其應用，提供雞傳染性法氏囊病病毒多抗原表位蛋白的制備方法，以及通過研究比較本發明制備的蛋白與兩種IBDV商品疫苗對雞的免疫效果，為IBDV疫苗的研制和該病的防治提供幫助。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：