[發明專利]一種低溫堆肥微生物復合菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011091765.2
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112410245A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 李春艷;王月;成毅;尤瑟夫·阿布德拉赫曼·尤瑟夫·阿卜杜拉;臧海蓮;孫珊珊;苗蕾;趙昕悅
• 申請（專利權）人: 哈爾濱雁成生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C05F15/00;C05F17/20;C12R1/01;C12R1/645
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

1.一種低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，包括由兩株耐冷纖維素降解菌組成的耐冷纖維素降解菌劑以及由一株17β-雌二醇降解菌和一株雌酮降解菌組成的類固醇雌激素降解菌劑；

其中，所述的兩株耐冷纖維素降解菌為季也蒙念珠菌(Meyerozymaguilliermondii)YC1以及季也蒙念珠菌(Meyerozymaguilliermondii)YC3，分別保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號分別為CGMCC NO.20604以及CGMCC NO.20605；

所述的17β-雌二醇降解菌為紅球菌(Rhodococcuserythropolis)D310-1，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC NO.11569；

所述的雌酮降解菌為小桿菌(Microbacterium)ML-6，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC NO.20608。

2.如權利要求1所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，將所述的耐冷纖維素降解菌YC1，YC3按照等濃度進行混合，獲得耐冷纖維素降解菌劑；將所述的17β-雌二醇降解菌D310-1與雌酮降解菌ML-6按照等濃度進行混合，獲得類固醇雌激素降解菌劑。

3.如權利要求1所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，將所述的耐冷纖維素降解菌YC1，YC3培養至指數生長期，離心富集菌體至終濃度為OD₆₀₀＝2，用無菌水將耐冷纖維素降解菌YC1，YC3的菌懸液濃度調至原濃度的10％，然后按照體積比1：1混合兩株耐冷纖維素降解菌，獲得耐冷纖維素降解菌劑；同時，將所述的17β-雌二醇降解菌D310-1以及雌酮降解菌ML-6培養至指數生長期，離心富集菌體至終濃度為OD₆₀₀＝2，用無菌水稀釋至原濃度的10％，按照體積比1：1混合17β-雌二醇降解菌D310-1以及雌酮降解菌ML-6，獲得類固醇雌激素降解菌劑。

4.如權利要求3所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，將所述的耐冷纖維素降解菌YC1，YC3分別接種于PDB培養基中，10℃，160rpm培養至指數生長期。

5.如權利要求4所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，所述的PDB培養基中含有馬鈴薯提取物200g/L、葡萄糖20g/L、蛋白胨6g/L。

6.如權利要求3所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，將所述的17β-雌二醇降解菌D310-1以及雌酮降解菌ML-6分別接種于LB培養基中，25℃，160rpm培養至指數生長期。

7.如權利要求6所述的低溫堆肥微生物復合菌劑，其特征在于，所述的LB培養基中含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L。

8.一種低溫農業廢棄物堆肥方法，其特征在于，包括使用權利要求1-7任一項所述的低溫堆肥微生物復合菌劑和低溫堆肥反應的步驟，堆肥過程中環境周圍溫度范圍為11-12.5℃。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)秸稈的預處理

秸稈使用粉碎機粉碎，過40目篩，獲得的秸稈粉末備用；

(2)堆肥混合物制備

將秸稈粉與畜禽糞便均勻混合，向混合物中噴灑無菌水，保持混合物的含水量為60％；

(3)堆肥

在堆肥初期，向堆肥混合物中加入其質量百分比為10％的權利要求書1-7任一項所述的耐冷纖維素降解菌劑以及質量百分比為2％的腐殖酸；隨著堆肥反應的啟動，堆肥溫度逐漸上升，到達中溫期(20℃-30℃)，向堆肥混合物中加入其質量百分比為10％的權利要求書1-7任一項所述的類固醇雌激素降解菌劑；

整個堆肥過程曝氣率為0.025L/min，每隔8小時，曝氣15分鐘，每12小時檢測一次堆肥溫度，直到堆肥結束。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于，秸稈和畜禽糞便的干重混合比例為7:5，碳氮比為29.7。