[發明專利]幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗及制備方法與應用

有效

• 申請號: 202011088805.8
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112402600B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 劉昆梅;郭樂;楊華;王淑娥;張帆;姜中佳
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/106;A61K47/46;A61P31/04;A61P1/00;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 寧夏合天律師事務所 64103
• 代理人: 曹廣濤

1.一種幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗，其特征在于，所述GEM顆粒疫苗包括在GEM顆粒表面展示重組抗原SAM^E-FVpE；重組抗原SAM^E-FVpE含有核心組件SAM^E和幽門螺旋桿菌毒力因子多表位肽FVpE。

2.根據權利要求1所述的幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗，其特征在于，所述毒力因子多表位肽FVpE的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼所述毒力因子多表位肽FVpE的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據權利要求1所述的幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗，其特征在于，所述核心組件SAM^E的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，編碼所述核心組件SAM^E的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根據權利要求1所述的幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗，其特征在于，重組抗原SAM^E-FVpE的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；重組抗原SAM^E-FVpE的核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

5.如權利要求1-4任一項所述幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗在制備防治幽門螺旋桿菌感染相關性胃病的藥物中的應用。

6.一種幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

合成如序列SEQ ID NO.4所示的SAM^E基因片段，將所述SAM^E基因片段通過酶切和連接，克隆到pCzn1載體上，得到peSAM^E重組載體；

通過擴增得到如序列SEQ ID NO.2所示的毒力因子多表位肽FVpE基因片段，將FVpE基因片段與經雙酶切的peSAM^E重組載體混合，通過一步法無縫克隆技術將FVpE片段克隆進peSAM^E重組載體，得到peSAM^E-FVpE重組載體；

將所述peSAM-FVpE重組載體轉化進宿主細胞，通過培養和誘導劑誘導表達，純化得到重組抗原SAM^E-FVpE；

通過三氯乙酸制備乳酸菌的GEM顆粒，將制備的所述GEM顆粒和所述重組抗原SAM^E-FVpE混合重懸，得到GEM顆粒疫苗GEM-SAM^E-FVpE。

7.根據權利要求6所述幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，所述誘導劑為IPTG，所述誘導劑的工作濃度為0.5mmol/L。

8.根據權利要求6所述幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，所述表達宿主細胞為大腸桿菌；

優選地，所述大腸桿菌選自ArcticExpress (DE3)，DH5α，TOP10，BL21(DE3)，BL21(DE3)pLysS或Rosetta；

優選地，所述大腸桿菌為ArcticExpress (DE3)。

9.根據權利要求8所述幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，純化重組蛋白包括層析和透析；所述柱層析選用Ni-IDA-Sepharose CL-6B親和層析柱；所述透析的透析液為20 mM Tris-HCl，0.10 M NaCl，pH8.0的透析液。

10.根據權利要求9所述幽門螺旋桿菌四價毒力因子GEM顆粒疫苗的制備方法，其特征在于，所述層析緩沖液的流速為0.5-1mL/min，所述透析的透析液為20 mmol/L Tris-HCl，0.10 mol/L NaCl，pH8.0的溶液。