[發明專利]一種非診斷目的檢測尿液中肌氨酸的方法

有效

• 申請號: 202011087393.6
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112162049B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 劉翼飛;劉曉紅;何心友;韓婧;張夢娜
• 申請（專利權）人: 合肥譜佳醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 何子睿

本發明提供了一種非診斷目的檢測尿液中肌氨酸的方法，采用本發明的方法檢測尿液中肌氨酸具有較高的準確度，并且特異性強，重現性好，前處理過程無須衍生和氮吹，操作簡單，一般實驗室均可完成，可以進行大批量樣本處理和檢測。

技術領域

本發明涉及尿液檢測技術領域，特別涉及一種非診斷目的高效液相色譜串聯質譜檢測尿液中肌氨酸的方法。

背景技術

前列腺癌是威脅男性健康的常見腫瘤之一，病死率僅次于肺癌，中國的前列腺癌發病率呈明顯上升趨勢，大部分患者以尿路癥狀或骨痛就診，血清前列腺特異性抗原(prostate antigen,PSA)檢測在臨床上廣泛應用于前列腺癌的早期篩查和診斷。臨床上需要對PSA異常患者進行穿刺活檢去的組織病理學診斷后方可確診。PSA是前列腺特異性抗原非前列腺癌特異性抗原，診斷結果存在灰區。PSA在診斷前列腺癌灰區的含量為4-10ng/mL,在此區間不能準去的區分前列腺癌增生、前列腺炎和早期前列腺癌。在中國，PSA含量4-10ng/mL范圍內穿刺活檢前列腺癌陽性率不足20％，且確診需活檢數次，對于患者來說這一過程非常痛苦。此外，活檢穿刺可能會增加腫瘤轉移風險增加感染等并發癥的發生。

肌氨酸是一種存在于人體肌肉和其他組織的天然氨基酸，為甘氨酸的代謝產物，前列腺癌患者的尿液中肌氨酸水平顯著高于健康人群，可作為前列腺癌的新型、簡便、無創的生物標志物，臨床檢測數值可用于評判患者前列腺癌患癌的可能性，且對早期前列腺癌的診斷準確性優于PSA。肌氨酸加成呢僅需采集患者清晨中段尿液，增加前列腺癌的檢測準確率，減少血樣采集及活檢穿刺給患者帶來的痛苦。

基于我國初診前列腺癌分期偏晚，早期前列腺癌具有隱匿性的特點，且早期前列腺癌存在有效的治療措施，以及國內外研究和文獻報道的支持，在我國開展前列腺癌的檢查具有重大的意義，可提高前列腺的治療效果，改善預后等。

目前衍生化高效液相色譜法在臨床肌氨酸的檢測中應用較多，但存在操作繁瑣、影響因素多、分析時間長等缺點，給實際工作帶來了諸多不便。本專利采用液相色譜-質譜聯用法對尿液中的肌氨酸進行檢測，前處理無需衍生，省時省力的同時提高了檢測結果的敏感性。

發明內容

本發明的目的是解決現有肌氨酸檢測方法的缺陷，提供了一種非診斷目的非衍生化方法檢測尿液中肌氨酸的方法。

一種非診斷目的檢測尿液中肌氨酸的方法，包括如下步驟：(1)使用A1試劑和A2試劑對尿液樣品中的肌氨酸進行釋放；(2)使用液相色譜法對釋放后的肌氨酸進行進一步分離；(3)使用質譜法分析釋放的肌氨酸，從而對肌氨酸進行定性和/或定量檢測。

色譜條件包括：色譜柱為C18柱，流動相A為甲酸水，流動相B為甲酸甲醇，梯度洗脫。

進一步地，色譜柱為Phenomenex Kinetex-C18，50×2.1mm，1.7μm；流動相A為0.1％的甲酸水，流動相B為0.1％的甲酸甲醇。

進一步地，色譜條件還包括：流速為0.3mL/min，柱溫為40℃，進樣體積為2μL。

進一步地，梯度洗脫程序見下表：