[發明專利]一種表達免疫調控因子的CAR-T細胞及其應用

在審

• 申請號: 202011086735.2
• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN112210540A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 湯朝陽;秦樂;吳迪;魏志輝;王翠花;王艷艷;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廣東昭泰體內生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種表達免疫調控因子的CAR-T細胞，其特征在于，所述CAR-T細胞表達特異性結合抗原的嵌合抗原受體、分泌性IL-7和條件性CCL19；

所述IL-7的信號肽為IFN-γ信號肽；

所述CCL19的啟動子為NFAT調控啟動子。

2.根據權利要求1所述的CAR-T細胞，其特征在于，所述IFN-γ信號肽包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

優選地，所述IL-7包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

優選地，所述CCL19包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

3.根據權利要求1或2所述的CAR-T細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括信號肽、抗原結合結構域、跨膜結構域和信號傳導結構域；

優選地，所述信號肽包括CD8α信號肽；

優選地，所述抗原結合結構域結合腫瘤表面抗原，所述腫瘤表面抗原包括CD19、CD20、CD22、CD30、CEA、EGFR、BRAF、HER-2、Mesothelin、MUC1、PSCA、GPC3、TERT、PTEN、PD-1、PD-L1或VEGF中的任意一種，優選為CD19、MUC1、GPC3、Mesothelin、PSCA或HER2中的任意一種，進一步優選為GPC3；

優選地，所述抗原結合結構域為靶向GPC3的單鏈抗體；

優選地，所述跨膜結構域包括CD28跨膜結構域和/或CD8α跨膜結構域，優選為CD8α跨膜結構域；

優選地，所述信號傳導結構域包括CD28胞內結構域、CD3ζ、TLR2、4-1BB、TLR1、CD27、OX40或DAP10中的任意一種或至少兩種的組合，優選為4-1BB和CD3ζ的組合。

4.根據權利要求1-3任一項所述的CAR-T細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體由CD8α信號肽、抗GPC3單鏈抗體、CD8α跨膜結構域、4-1BB和CD3ζ串聯組成；

優選地，所述嵌合抗原受體包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

5.一種慢病毒載體，其特征在于，所述慢病毒載體包括IFN-γ信號肽編碼基因、IL-7編碼基因、NFAT調控啟動子和CCL19編碼基因。

6.根據權利要求5所述的慢病毒載體，其特征在于，所述IFN-γ信號肽編碼基因包括SEQ ID NO:5所示的核酸序列；

優選地，所述IL-7編碼基因包括SEQ ID NO:6所示的核酸序列；

優選地，所述NFAT調控啟動子包括SEQ ID NO:7所示的核酸序列；

優選地，所述CCL19編碼基因包括SEQ ID NO:8所示的核酸序列。

7.一種重組慢病毒，其特征在于，所述重組慢病毒采用權利要求5或6所述的慢病毒載體與包裝輔助質粒共轉染哺乳細胞制備得到。

8.一種權利要求1-4任一項所述的CAR-T細胞的制備方法，其特征在于，所述方法包括將權利要求5或6所述的慢病毒載體或權利要求7所述的重組慢病毒導入表達CAR分子的T細胞的步驟。

9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權利要求1-4任一項所述的CAR-T細胞；

優選地，所述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中的任意一種或至少兩種的組合。

10.權利要求1-4任一項所述的CAR-T細胞、權利要求5或6所述的慢病毒載體、權利要求7所述的重組慢病毒或權利要求9所述的藥物組合物在制備實體瘤治療藥物中的應用；

優選地，所述實體瘤包括肝癌、頭頸癌、黑色素瘤、膀胱癌、膠質母細胞瘤、宮頸癌、肺癌、軟骨肉瘤、甲狀腺癌、腎癌、間皮瘤、骨肉瘤、直腸癌、肛區癌、膽管癌、子宮癌、卵巢癌、胃癌、前列腺癌、腦膜瘤、胰腺癌、多發性鱗狀細胞瘤、食管癌、結直腸癌、乳腺癌或成神經管細胞瘤中的任意一種或至少兩種的組合。