[發(fā)明專利]一種鑒別人參屬植物單核苷酸多態(tài)的系統(tǒng)以及鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011085927.1
• 申請(qǐng)日: 2020-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN112176089B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志恒;奧伯克·克里斯托弗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 珠海澳加動(dòng)力生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6827;C12Q1/6834;C12N15/11
• 代理公司: 重慶強(qiáng)大凱創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50217
• 代理人: 蒙捷

1.一種基于鑒別人參屬植物單核苷酸多態(tài)的系統(tǒng)的鑒別方法，其特征在于：所述人參屬植物包括西洋參和人參兩種；所述系統(tǒng)包括用于檢測(cè)DNA模板的檢測(cè)單元；所述檢測(cè)單元包括固定片段和LIDA混合溶液，所述固定片段的5’端固定在固相支持物上；LIDA混合溶液包括終濃度為30μM的游離片段、終濃度為30μM的特異性片段、終濃度為25 μM的檢測(cè)片段、終濃度為25 μM的通用片段、連接酶反應(yīng)緩沖液、終濃度為1.25 U/μL的T4 DNA連接酶；T4DNA連接酶為5 U/μL規(guī)格的TF連接酶；連接酶反應(yīng)緩沖液的成分為：50 mM Tris-HCl、10 mMMgCl₂、1 mM ATP、10 mM DTT，pH值為7.5，連接酶反應(yīng)緩沖液和LIDA混合溶液的體積比為1：2；LIDA混合溶液中的鎂離子的終濃度為20mM；

在檢測(cè)人參的SNP位點(diǎn)時(shí)，固定片段為：NH₂-5’-CAATTTAAG-3’；特異性片段為：5’-TCTTAAATTG-3’；檢測(cè)片段為：5’-AbCACTTTC-3’-bio；通用片段為：5’-GAAAGTG-3’；游離片段為：NH₂-5’-CAATTTAAG-3’；

在檢測(cè)西洋參的SNP位點(diǎn)時(shí)，固定片段為：NH₂-5’-CAATTTAAA-3’；特異性片段為：5’-TTTTAAATTG-3’；檢測(cè)片段為：5’-AbCACTTTC-3’-bio；通用片段為：5’-GAAAGTG-3’；游離片段為：NH₂-5’-CAATTTAAA-3’其中，NH₂表示5’端氨基修飾，bio表示3’端生物素修飾，Ab表示無堿基功能團(tuán)；

所述鑒別方法包括以下步驟：

（1）探針固定和模板獲取：將固定片段固定在固相支持物上；從樣品中獲得Ⅰ類模板；

（2）連接過程：包括用于檢測(cè)人參SNP位點(diǎn)的連接過程：使LIDA混合溶液、Ⅰ類模板與固定片段接觸并進(jìn)行4h的LIDA連接反應(yīng)，獲得第一連接產(chǎn)物；還包括用于檢測(cè)西洋參SNP位點(diǎn)的連接過程；使LIDA混合溶液、Ⅰ類模板與固定片段接觸并進(jìn)行4h的LIDA連接反應(yīng)，獲得第二連接產(chǎn)物；

（3）檢測(cè)第一連接產(chǎn)物的熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度計(jì)為F1；檢測(cè)第二連接產(chǎn)物的熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度計(jì)為F2；當(dāng)F1/F2＞2時(shí)，樣品含有純的人參；當(dāng)F1/F2＜0.5時(shí)，樣品含有純的西洋參；當(dāng)0.5≤F1/F2≤2時(shí)，樣品含有人參和西洋參。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于鑒別人參屬植物單核苷酸多態(tài)的系統(tǒng)的鑒別方法，其特征在于：所述無堿基功能團(tuán)為1’,2’-雙脫氧核糖。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于鑒別人參屬植物單核苷酸多態(tài)的系統(tǒng)的鑒別方法，其特征在于：所述固相支持物為微流控生物芯片的醛基化的載玻片。