[發明專利]高特異性和強親和力的抗人Lp-PLA2蛋白的單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202011085906.X
• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN112210012A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 芮兵
• 申請（專利權）人: 南京佰抗生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 連云港聯創專利代理事務所(特殊普通合伙) 32330
• 代理人: 魯超

本發明提供了兩株高特異性、強親和力和穩定性好的單克隆抗體A2?Ab1和A2?Ab2，兩種單克隆抗體能準確識別人源LP?pla2，可作為診斷試劑的關鍵性原材料，可基于該兩株抗體成功開發出出靈敏度高、特異性強的診斷試劑或檢測儀器；本發明建立了基于膠乳比濁法的Lp?PLA2檢測試劑盒，從而實現對Lp?PLA2濃度的準確檢測，本發明的Lp?PLA2試劑盒和同項目進口試劑在臨床應用上相關性較好，試劑性能突出，能很好滿足臨床檢驗需求。

技術領域

本發明涉及免疫學和生物醫藥工程技術領域，具體涉及人脂蛋白相關磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase 2,Lp-PLA2)抗原制備、單克隆抗體篩選和擴大生產及所述抗體在體外診斷試劑盒中的應用。

背景技術

目前動脈粥樣硬化性心血管疾病已對人類健康的造成重大影響。動脈粥樣硬化病理發生和發展機制主要包括血脂異常、氧化應激和炎癥反應，其病變發展過程一般從血管內膜起始，隨著糖類和脂類聚集、出血及血栓初步形成，進一步導致纖維組織增生和鈣質沉積，同時動脈中層逐步蛻化、鈣質化，最終導致動脈壁變厚硬化、血管管腔狹小，嚴重者可阻塞動脈腔，造成動脈供應組織器官缺血、壞死。

脂蛋白相關磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase2,Lp-PLA2)是一種血管特異性炎癥因子，由441個氨基酸組成，與動脈粥樣硬化形成、心腦血管疾病發生等相關。Lp-PLA2也被稱為血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，是磷脂酶A2超家族成員。Lp-PLA2可以由血管內膜中的巨噬細胞、單核細胞、泡沫細胞等分泌，水解磷脂甘油上的乙酰基進而生成氧化脂肪酶和溶血磷脂，水解產物通過一系列關聯反應最終改變動脈壁特性、引發動脈粥樣斑塊形成，由此可見Lp-PLA2具有加速炎癥反應和促進動脈粥樣硬化形成的作用。

當動脈粥樣硬化發展到嚴重程度時，血液中Lp-PLA2濃度將大幅度提高，可通過檢測血樣中的Lp-PLA2濃度評估動脈硬化危險等級。

綜上，Lp-PLA2是一種對心腦血管疾病預測及預后判斷具有重要意義的標志物，通過對其濃度水平的檢測，可為臨床疾病的預防、診斷、治療及預后跟蹤提供重要參考依據，降低動脈粥樣硬化累心腦血管疾病的危害。

目前國內外可適用于Lp-PLA2診斷試劑的抗體原料相對較少，價格昂貴。不少Lp-PLA2診斷試劑產品性能受限于關鍵原料抗體質量、試劑工藝等因素，準度相對較差，不能為臨床診斷提供可靠信息。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術中Lp-PLA2診斷試劑準確性較差的缺陷，提供一種高特異性和強親和力的抗人Lp-PLA2蛋白的單克隆抗體及其應用。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

一種高特異性和強親和力的抗人Lp-PLA2蛋白的單克隆抗體，包括單克隆抗體A2-Ab1和/或單克隆抗體A2-Ab2，兩株抗體能同時結合到抗原表面不同表位形成雙抗體夾心模式；

其中，所述單克隆抗體A2-Ab1重鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述單克隆抗體A2-Ab2重鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

一種包含有單克隆抗體A2-Ab1和/或單克隆抗體A2-Ab2的Lp-PLA2檢測試劑盒。

優選的，一種檢測Lp-PLA2膠乳比濁法試劑盒，在膠乳表面標記有單克隆抗體A2-Ab1和A2-Ab2抗體，通過雙抗體夾心法檢測Lp-PLA2濃度，具體方法如下：

標記：將A2-Ab1和A2-Ab2通過物理吸附、化學偶聯或基于親和作用標記至膠乳表面；