[發明專利]用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202011082030.3
• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN114354772B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 李國衛;何民友;胡綺萍;邱韻靜;陳向東;魏梅;孫冬梅;吳文平;程學仁
• 申請（專利權）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 杜寒宇

1.一種用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

分別制備中華鱉鱉甲藥材供試品溶液、烏龜龜甲藥材供試品溶液、佛羅里達鱉鱉甲供試品溶液、角鱉鱉甲供試品溶液、中華鱉鱉甲標準湯劑供試品溶液、中華鱉醋鱉甲標準湯劑供試品溶液和烏龜醋龜甲標準湯劑供試品溶液；

對所述中華鱉鱉甲藥材供試品溶液、烏龜龜甲藥材供試品溶液、佛羅里達鱉鱉甲供試品溶液、角鱉鱉甲供試品溶液、中華鱉鱉甲標準湯劑供試品溶液、中華鱉醋鱉甲標準湯劑供試品溶液和烏龜醋龜甲標準湯劑供試品溶液進行超高效液相色譜聯用質譜測定；

將所得數據導入Proteome Discoverer分析軟件，采用Uniprot的數據庫Testudines進行搜庫匹配，采用SEQUEST檢索算法，篩選獲得用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合。

2.根據權利要求1所述的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，所述超高效液相色譜聯用質譜的色譜條件包括：以乙腈為流動相A，以體積分數為0.05％～0.2％的甲酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，所述梯度洗脫包括如下程序：

0min～9min，所述流動相A的體積分數由8％上升到11％，所述流動相B的體積分數由92％下降到89％；

9min～11min，保持所述流動相A的體積分數為11％，所述流動相B的體積分數為89％；

11min～17min，所述流動相A的體積分數由11％上升到21％，所述流動相B的體積分數由89％下降到79％；

17min～21min，所述流動相A的體積分數由21％上升到35％，流動相B的體積分數由79％下降到65％。

3.根據權利要求2所述的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，所述超高效液相色譜聯用質譜的色譜條件還包括：柱溫為35℃±10℃，流速為0.35mL/min±0.10mL/min。

4.根據權利要求2所述的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，所述超高效液相色譜聯用質譜的質譜條件包括：質量分析器為四極桿-靜電場軌道阱；電噴霧正離子模式，進行多反應監測。

5.根據權利要求4所述的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，所述超高效液相色譜聯用質譜的質譜條件還包括：鞘氣流速為10Arb±2Arb；輔助氣流速為10Arb±2Arb；噴霧電壓為3.80kV±0.2kV；毛細管溫度為320℃±10℃；輔助氣溫度為320℃±10℃；碰撞能量為30％±5％。

6.根據權利要求1-5任一項所述的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合的篩選方法，其特征在于，所述中華鱉鱉甲藥材供試品溶液、烏龜龜甲藥材供試品溶液、佛羅里達鱉鱉甲供試品溶液、角鱉鱉甲供試品溶液、中華鱉鱉甲標準湯劑供試品溶液、中華鱉醋鱉甲標準湯劑供試品溶液和烏龜醋龜甲標準湯劑供試品溶液的制備步驟分別為：

混合溶劑和中華鱉鱉甲藥材，加熱回流后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備中華鱉鱉甲藥材供試品溶液；

混合溶劑和烏龜龜甲藥材，加熱回流后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備烏龜龜甲藥材供試品溶液；

混合溶劑和佛羅里達鱉鱉甲，加熱回流后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備佛羅里達鱉鱉甲供試品溶液；

混合溶劑和角鱉鱉甲，加熱回流后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備角鱉鱉甲供試品溶液；

混合溶劑和中華鱉鱉甲標準湯劑，超聲后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備中華鱉鱉甲標準湯劑供試品溶液；

混合溶劑和中華鱉醋鱉甲標準湯劑，超聲后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備中華鱉醋鱉甲標準湯劑供試品溶液；

混合溶劑和烏龜醋龜甲標準湯劑，超聲后，加入胰蛋白酶溶液酶解，制備烏龜醋龜甲標準湯劑供試品溶液。

7.一種鱉甲和龜甲的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

制備待測樣品溶液；

對所述待測樣品溶液進行超高效液相色譜聯用質譜測定，將測定結果與權利要求1所述的篩選方法獲得的用于鱉甲和龜甲檢測的特征多肽組合進行對比。