[發明專利]一種雜交瘤細胞株、其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011081642.0
• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN112251414A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 索廣力;瞿偉偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/569
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒

1.一種雜交瘤細胞株的制備方法，其特征在于包括：以人SARS-CoV-2S重組蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，之后取免疫小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合，其后篩選出能夠分泌新冠病毒表面S抗原單克隆抗體的陽性融合細胞，即為所述雜交瘤細胞。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于具體包括：

以純化的人SARS-CoV-2S重組蛋白為免疫原免疫8-12周齡BALB/c雌性小鼠，初次用弗氏完全佐劑與免疫原進行乳化，經皮下和腹腔多點免疫，劑量為100-150μg免疫原/只；隔兩周加強免疫一次，共三次，佐劑為弗氏不完全佐劑，劑量為100-120μg免疫原/只/次；采用間接ELISA法檢測小鼠尾血效價＞1∶104，融合前三天進行腹腔注射加強免疫100-120μg免疫原/只；

以及，取免疫后小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0按照3-5∶1的比例混合后，以1000-1200rpm的轉速離心10-15min，之后以RPMI-1640培養基重懸細胞，再次以1000-1200rpm的轉速離心10-15min，并將沉淀細胞松散均勻且于37℃預熱，在60s內加入預熱的PEG1500，然后緩慢滴加RPMI1640培養基，再次以1000-1200rpm的轉速離心10-15min，其后以HAT培養基重懸細胞，并置于37℃，5％CO₂培養箱內培養。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于具體包括：至少采用流式單細胞分選方法或有限稀釋法對融合細胞進行篩選；和/或，所述人SARS-CoV-2S重組蛋白的序列如SEQID NO：1所示。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于具體包括：采用Elisa法進行活性篩選，從而獲得能夠分泌新冠病毒表面S抗原單克隆抗體的陽性融合細胞。

5.由權利要求1-4中任一項所述方法制備的雜交瘤細胞株。

6.一種新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體由權利要求6所述雜交瘤細胞株分泌。

7.一種新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體，其特征在于包括單克隆抗體1S和/或單克隆抗體2S；所述單克隆抗體1S的重鏈VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3序列分別如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示，輕鏈VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3序列分別如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示；所述單克隆抗體2S的重鏈VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10所示，輕鏈VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3序列分別如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示。

8.一種新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體的制備方法，其特征在于包括：利用權利要求5所述的雜交瘤細胞株，通過小鼠腹水法制備新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體。

9.權利要求6或7所述新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體在制備檢測新冠病毒檢測試劑或試劑盒中的應用。

10.一種新冠病毒檢測試劑，其特征在于包含權利要求6或7所述新冠病毒表面刺突糖蛋白單克隆抗體。