[發(fā)明專利]一種豬鏈球菌c-di-AMP合成酶抑制劑的篩選方法及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011081126.8 | 申請日： | 2020-10-11 |
| 公開（公告）號： | CN112362640B | 公開（公告）日： | 2021-10-26 |
| 發(fā)明（設計）人： | 周銳;李昊天;李婷婷;黎璐;黃琦 | 申請（專利權）人： | 華中農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | G01N21/76 | 分類號： | G01N21/76 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001 | 代理人： | 張紅兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 鏈球菌 di amp 合成 抑制劑 篩選 方法 及其 應用 | ||
1.一種基于化學發(fā)光的豬鏈球菌c-di-AMP合成酶抑制劑IPA-3的高通量篩選方法，其特征在于,所述抑制劑IPA-3小分子的化學結構式如下所示：
所述的篩選方法包括如下步驟：
(1)在黑色的U型底384孔板中加入4.5μL包含終濃度為150mM的NaCl，10mM的MgCl2,50mMl pH7.5的Tris-HC，100μM c-di-AMP重組蛋白的混合體系，用多通道移液器加濃度為0.5μL，體積為10mM溶于二甲基亞砜的藥物，設置陽性對照與陰性對照各10個重復；
(2)將所述384孔板置于4℃孵育30min，然后加5μL 1mM ATP，置于37℃反應2h后取出在室溫下冷卻5min，加入10μL Reagent，反應10min后，用酶標儀測量相對發(fā)光值RLU；
(3)采用如下公式計算藥物酶活的抑制率：
藥物酶活抑制率＝(待測藥物化學發(fā)光值–陽性組化學發(fā)光平均值)/(陰性組化學發(fā)光平均值–陽性組化學發(fā)光平均值)；
(4)按照上述步驟對MedChemExpress公司的激酶抑制劑藥庫HY-L001進行篩選，得到對c-di-AMP酶活抑制率為82.33％的抑制劑IPA-3。
2.權利要求1所述的方法在豬鏈球菌c-di-AMP合成酶抑制劑IPA-3篩選中的應用。
3.應用權利1所述方法篩選得到的豬鏈球菌c-di-AMP合成酶的抑制劑IPA-3。
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