[發明專利]用于子癇前期臨床風險評估的長鏈非編碼RNA

有效

• 申請號: 202011080896.0
• 申請日: 2020-10-11
• 公開（公告）號: CN112210599B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 張慧萍;姜怡鄧;張輝;劉圓;馬芳;馬勝超;楊安寧
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院;寧夏醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 寧夏合天律師事務所 64103
• 代理人: 郭立寧

用于子癇前期臨床風險評估的長鏈非編碼RNA，包括以下步驟：查閱并分析患者病歷資料，收集正常孕婦及子癇前期孕婦胎盤組織；制備胎盤組織石蠟切片，胎盤組織馬松染色觀察胎盤組織結構改變；生物信息學分析損傷誘導的非編碼RNA的結構；提取胎盤組織長鏈非編碼RNA，并檢測損傷誘導的非編碼RNA表達改變；培養人源胎盤滋養細胞，篩選損傷誘導的非編碼RNA干擾片段；干擾損傷誘導的非編碼RNA后，檢測基質金屬蛋白酶2(MMP?2)蛋白表達改變；干擾損傷誘導的非編碼RNA后，劃痕試驗檢測細胞遷移能力及侵襲實驗檢測細胞侵襲改變。本發明取材來自胎盤組織，樣本獲取簡單便捷，不會造成患者任何創傷，具有較強的可行性。

技術領域

本發明屬于醫學技術領域，是涉及用于子癇前期臨床風險評估的長鏈非編碼RNA。

背景技術

子癇前期( preeclampsia，PE) 是造成孕產婦多器官、多系統損傷的一種常見的妊娠期并發癥，屬于妊娠期特發疾病中的一種，常以妊娠20周后出現高血壓、蛋白尿為主要臨床表現，嚴重時可產生全身系統功能障礙，是孕產婦妊娠期及圍生兒死亡的重要原因。血液、尿液、眼底檢查等是子癇前期現階常用診斷方法，但此類方法傳統，主要還是依靠特征性對的疾病臨床表現進行診斷，但通常診斷明確時，孕周通常較大。在治療方面，目前也只能對癥治療緩解癥狀，由于孕婦用藥的特殊性，少有既能保障安全又能確保療效的藥物；在有效治療方案缺乏的情況下，終止妊娠是徹底治愈的唯一措施，而娩出的未足月兒及低出生體重兒將為家庭帶來沉重的經濟負擔。基于此，尋找一種用于子癇前期臨床風險評估的分子診斷標志物，探討子癇前期的防治策略，全面響應國家“優生優育”政策，這對提高人類生殖健康水平、優化出生人口素質具有長足且深遠的意義。

子癇前期的病因可能涉及多種因素，包括異常的滋養細胞浸潤、免疫調節功能障礙、遺傳因素、胰島素抵抗和營養不良等。目前較普遍認為滋養細胞浸潤過淺所致的子宮螺旋動脈重塑障礙、胎盤淺著床是子癇前期發生發展的主要原因。子癇前期的發展主要分為兩個階段，妊娠早期階段：胎盤在形成時期血液灌注不足、免疫耐受等多因素作用下，使滋養細胞侵襲不足，螺旋動脈重鑄障礙，造成胎盤供血供氧不足；妊娠晚期階段：由于氧化應激、炎癥反應等導致胎盤合成并釋放大量因子，引起母體血管內皮功能紊亂，各器官內皮細胞功能障礙，全身小血管痙攣，進而引起各種臨床癥狀。胎盤作為妊娠期特有的重要臨時性器官，承載著母體營養傳輸和母胎屏障等重要功能，也是妊娠期母胎之間適應性調節的重要紐帶，其發育的異常是子癇前期等不良妊娠結局發生的關鍵。而滋養細胞作為胎盤組織的重要功能細胞，在正常妊娠時原始細胞滋養細胞逐漸分化為絨毛外滋養細胞，該細胞進行增殖和侵襲促進螺旋動脈重塑，其通過類似腫瘤細胞的浸潤能力，穿透母胎界面，促使胎盤形成，從而維持正常的胎盤功能。因此，絨毛外滋養細胞的增殖和侵襲能力對胎盤的發育至關重要。

長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一類內源性的、長度大于200個核苷酸的RNA分子，位于細胞質或者細胞核中，由于缺乏顯著開放閱讀框（ORF）而不具有編碼蛋白質功能，近年來隨著高通量測序和生物信息學技術的發展，檢測發現越來越多的長鏈非編碼RNA能夠通過對染色質重塑、mRNA降解和翻譯抑制等過程進行調控而影響疾病的發生。有文獻報道，長鏈非編碼RNA在子癇前期的發生發展中表現出不同的表達模式，發揮不同的作用，可以影響滋養細胞的增殖，遷移，侵襲和凋亡等，進而影響子癇前期的發生發展。損傷誘導的非編碼RNA(Damage Induced Noncoding，DINO)是長鏈非編碼RNA分子中的一員，其可促進DNA損傷，影響細胞凋亡等生物學進程，其存在通過調控細胞侵襲、遷移參與子癇前期發生發展的可能。我們在子癇前期患者胎盤組織中通過RT-qPCR檢測子癇前期患者胎盤組織中lncRNA DINO（損傷誘導的非編碼RNA）表達增加，細胞水平轉染lncRNA DINO干擾片段，劃痕實驗及Transwell 侵襲實驗檢測細胞遷移、侵襲能力增強，MMP-2蛋白表達增加，表明lncRNA DINO表達增加能夠降低滋養細胞遷移及侵襲能力，由此可見，lncRNADINO是影響胎盤滋養細胞侵襲及遷移能力的關鍵分子，可作為臨床早期診斷和病情發展評估提供一類新的標志物，也為臨床治療滋養細胞浸潤不足所致的子癇前期提供新的治療思路，具有潛在的價值。