[發明專利]一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202011077976.0
• 申請日: 2020-10-10
• 公開（公告）號: CN112057614B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 沈建軍;陳雪;張秀文;屈健;陳芳;李陽
• 申請（專利權）人: 浙江美保龍生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 張晨

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑，其特征在于：所述免疫增強劑包括0.15-1.2mg/mL的單磷酰脂質A、0.5-0.9mg/mL 的β-葡聚糖和10-50mg/mL 的豬源細胞質多肽；按質量份數所述單磷酰脂質A為6-12份、β-葡聚糖7-11份和豬源細胞質多肽10-18份；所述豬源細胞質多肽的制備方法，包括以下步驟：

S1、取新鮮的豬源性組織使用去離子水清洗、分割，加入去離子水高速絞碎成漿液；

S2、在漿液中加入總質量1-2%的氯化鈉，加熱到80-100℃下溶解，然后進行抽濾，收集濾液，得到第一濾液和濾渣；

S3、向第一濾液中加入第一濾液總重量2-3%的2709堿性蛋白酶和第一濾液總重量1-2%豬源細胞質多肽提取劑，在溫度為55-65℃，pH為8-9的條件下間歇攪拌，酶解提取5-7h，得到第一酶解提取液，所述豬源細胞質多肽提取劑，按體積份數，包括磷酸溶液1-2份、乙腈溶液2-3份、甲醇溶液0.5-0.8份和三氟乙酸0.2-0.6份組成的混合溶液；

S4、在濾渣中加入與濾渣等質量的去離子水，然后加入2709堿性蛋白酶調節混合液的pH為8-9，再加入總質量4-6％的豬源細胞質多肽提取劑，將其控制在45-50℃的溫度下酶解提取5-7h，得到第二酶解提取液；

S5、將第一酶解提取液和第二酶解提取液混合，在45-50℃的溫度下酶解提取1-2h，然后抽濾，收集濾液，得到第二濾液；

S6、在第二濾液中加入第二濾液質量2-3％的活性炭，攪拌反應50-70min，濾出活性炭，調節濾液pH為7，先經蒸發濃縮，再經過干燥后得到豬源細胞質多肽。

2.根據權利要求1所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑，其特征在于：所述免疫增強劑包括0.65mg/mL的單磷酰脂質A、0.75mg/mL的β-葡聚糖和25mg/mL的豬源細胞質多肽；按質量份數所述單磷酰脂質A為9份、β-葡聚糖9份和豬源細胞質多肽14份。

3.根據權利要求2所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑，其特征在于：所述免疫增強劑為油乳劑。

4.一種如權利要求1-3任一權利要求所述的豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑的制備方法，其特征在于：將含有單磷酰脂質A、豬源細胞質多肽和β-葡聚糖的混合液與吐溫-80混合，得到水相溶液；然后將白油和司盤-80混合，得到油相溶液；最后將水相溶液與油相溶液混合乳化后，得到滅活疫苗免疫增強劑。

5.根據權利要求4所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑的制備方法，其特征在于：所述吐溫-80的體積為單磷酰脂質A、豬源細胞質多肽和β-葡聚糖的混合液體積的1.5-2倍，所述白油和司盤-80的體積比為1:3，所述白油和司盤-80油相溶液的體積與吐溫-80的體積相等。

6.根據權利要求5所述的一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫增強劑的制備方法，其特征在于：所述豬源細胞質多肽提取劑，按體積份數，包括磷酸溶液1.5份、乙腈溶液2.5份、甲醇溶液0.65份和三氟乙酸0.4份組成的混合溶液。