[發明專利]培養基及其應用與誘導性多能干細胞向胰島分化的方法

有效

• 申請號: 202011072677.8
• 申請日: 2020-10-09
• 公開（公告）號: CN112251396B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 吳理達;顧雨春;張會遠;安翠平
• 申請（專利權）人: 北京呈諾醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/39;A61P3/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.一種培養基組合，其特征在于，由stage1培養基A、stage1培養基B、stage2培養基、stage3培養基、stage4培養基、stage5培養基、stage6A培養基stage6B培養基和stage7培養基組成；

所述stage1培養基A由MCDB131培養基、80ng/mL~120ng/mL GDF8、2~4 μmol/L CHIR-99021、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成;

所述stage1培養基B由MCDB131培養基、80ng/mL~120ng/mL GDF8、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成;

所述stage2培養基由MCDB131培養基、45ng/mL ~55ng/mL FGF7、0.2mmol/L~0.3mmol/L抗壞血酸、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage3培養基由MCDB131培養基、45ng/mL~55ng/mL FGF7、0.2mmol/L~0.3mmol/L抗壞血酸、0.2mmol/L~0.3mmol/L SANT-1、0.8μmol/L ~1.2μmol/L RA、1 mmol/L ~4 mmol/L ITS-X、80nmol/L~120nmol/L LDN193189、180nmol/L~220nmol/L TPB、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage4培養基由MCDB131培養基、1ng/mL~3ng/mL FGF7、0.2mmol/L~0.3mmol/L抗壞血酸、0.2mmol/L~0.3mmol/L SANT-1、0.08μmol/L ~0.12μmol/L RA、1 mmol/L ~4 mmol/L ITS-X、180nmol/L~220nmol/L LDN193189、80nmol/L~120nmol/L TPB、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage5培養基由MCDB131培養基、1.5 mmol/L ~2.5 mmol/L ITS-X、0.2μmol/L~0.3μmol/L SAN-T、0.04μmol/L~0.06μmol/L RA、0.8μmol/L~1.2μmol/L T3、80nmol/L~120nmol/L LDN193189、8μmol/L~12μmol/L ALK5抑制劑II、8μmol/L~12μmol/L硫酸鋅、8μg/mL ~12 μg/mL肝素鈉、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage6A培養基由MCDB131培養基、80 nmol/L ~120 nmol/L γ-分泌酶抑制劑、80nmol/L ~120 nmol/L LDN193189、1.8 mmol/L ~2.2 mmol/L ITS-X、0.8 μmol/L ~1.2 μmol/L T3、8μmol/L ~12 μmol/L ALK5抑制劑II、8μmol/L ~12μmol/L硫酸鋅、8μg/mL~12μg/mL肝素鈉、1 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage6B培養基MCDB131培養基、80 nmol/L ~120 nmol/L LDN193189、1.8 mmol/L~2.2 mmol/L ITS-X、0.8 μmol/L ~1.2 μmol/L T3、8μmol/L ~12 μmol/L ALK5抑制劑II、8μmol/L ~12μmol/L硫酸鋅、8μg/mL~12μg/mL肝素鈉、1 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L ~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成；

所述stage7培養基由MCDB131培養基、1 mmol/L ~4mmol/L ITS-X、0. 8μmol/L~1.2μmol/L T3、8μmol/L~12μmol/L ALK5抑制劑II、8μmol/L~12μmol/L硫酸鋅、8μg/mL ~12μg/mL肝素鈉、0.8 mmol/L ~1.2 mmol/L N-乙酰半胱氨酸、8 μmol/L~12 μmol/L Trolox、1.8μmol/L~2.2μmol/L R428、2 g/L ~4g/L碳酸氫鈉、1 mmol/L ~3mmol/L谷氨酰胺、15 mmol/L~25mmol/L葡萄糖和1%~3%BSA組成。