[發明專利]唾液代謝標志物在早期診斷口腔扁平苔蘚的應用

在審

• 申請號: 202011070740.4
• 申請日: 2020-10-09
• 公開（公告）號: CN112201344A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 趙紅宇;孫志;王曉霜;左莉華;劉麗偉;師瑩瑩;李希博;范蕊蕊;劉寧
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: G16H50/20
• 分類號: G16H50/20;G16H50/70;G06K9/62;G06F17/18;G01N33/50;G01N30/88
• 代理公司: 北京科石知識產權代理有限公司 11595
• 代理人: 劉艷春

1.一種輔助診斷口腔扁平苔蘚的唾液代謝標志物，其特征在于，所述唾液代謝標志物由3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黃嘌呤組成。

2.一種口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：

步驟一、獲取訓練病例集，所述訓練病例集中的受試者包括患病受試者和健康受試者；

步驟二、采集所述受試者的唾液樣本，對所述唾液樣本進行超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱串聯高分辨質譜分析，得到所述患病受試者和所述健康受試者的多個差異代謝物；

步驟三、利用變量權重重要性排序和受試者工作特征曲線，從多個所述差異代謝物確定3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黃嘌呤為口腔扁平苔蘚的輔助診斷模型。

3.根據所述權利要求2所述的口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：所述輔助診斷模型的曲線下面積、敏感度和特異性分別為0.921、74.4％和95.2％；所述輔助診斷模型的截斷值為0.681。

4.根據所述權利要求2所述的口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：所述輔助診斷模型中所述3-磷酸甘油的曲線下面積、敏感度和特異性分別為：0.843、97.6％和60.5％；所述2-氨基-1，3，4-十八烷三醇的曲線下面積、敏感度和特異性分別為：0.752、53.5％和92.9％；所述次黃嘌呤的曲線下面積、敏感度和特異性分別為：0.682、90.5％和51.2％。

5.根據所述權利要求2所述的口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：還包括唾液處理步驟，具體為：

收集所述受試者的唾液樣本，所述受試者在收集前1h未進食未進水；

靜置半小時后在4℃、3000rpm轉速的條件下離心10min，取上清液，將所述上清液放置在超低溫冰箱中保存備用；

所述上清液在冰上解凍，吸取100μL所述上清液置于1.5mL離心管中，然后加入0.3mL含內標的甲醇溶液沉淀蛋白，所述內標為：0.05μg/mL L-2-氯代苯丙氨酸和0.5μg/mL酮洛芬；

渦旋處理1min后，在4℃條件下，13000rpm離心10min；吸取上清液至進樣小瓶中，待質譜進行分析。

6.根據所述權利要求2所述的口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：所述超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱串聯高分辨質譜分析的條件為：

采用C18色譜柱，柱溫為40℃，以乙腈為流動相A，0.1％甲酸水溶液為流動相B；采用梯度洗脫程序分離：0～0.5min，5％流動相A；0.5～1.0min，5％～60％流動相A；1.0～7.0min，60％～80％流動相A；7.0～9.0min，80～100％流動相A；9.0～11.0min，100％流動相A；11.0～11.2min，100％-5％流動相A；11.2～13.0min，5％流動相A；洗脫程序的流速為0.2mL/min。

7.根據所述權利要求6所述的口腔扁平苔蘚輔助診斷模型構建方法，其特征在于，包括：將所述超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱串聯高分辨質譜系統串聯至可加熱的電噴霧離子源系統中；

輔助氣體的溫度為300℃，離子源的溫度為350℃，毛細管溫度為320℃，輔助氣體的流量是10arb；掃描范圍為：80.00m/z～1200.00m/z；在Full Mass/ddms²掃描模式下，以17500的二級質譜分辨率在正離子模式和負離子模式下進行檢測；梯度碰撞能量分別為20eV、40eV和60eV；在正離子模式下，噴霧電壓為3.50kV，鞘氣流速為40arb，在負離子模式下，噴霧電壓為2.80kV和鞘氣流速為38arb。

8.一種根據權利要求1所述的唾液代謝標志物在輔助診斷口腔扁平苔蘚上的應用。

9.一種口腔扁平苔蘚輔助診斷試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的唾液代謝標志物。