[發(fā)明專利]一種同時定量植物樣本中多種植物激素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011070609.8
• 申請日: 2020-10-06
• 公開（公告）號: CN112229928B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設計）人: 劉程;張永明;唐堂
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢邁特維爾生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 方菲

1.一種同時定量植物樣本中多種植物激素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，取液氮下研磨得到的植物樣本粉末，加入同位素內(nèi)標的混合液和提取溶劑，混勻，離心，得到提取液，將得到的提取液濃縮后再用復溶劑復溶，得到待檢測液，所述提取溶劑為甲醇、水、甲酸按照體積比為(12-15):(4-6):1制備得到混合液；

S2，分別配制預檢測物質(zhì)的一系列濃度梯度的植物激素標準溶液，所述標準溶液中均含有內(nèi)標物；

S3，將步驟S2中制備得到的標準溶液在LC-MS/MS多反應監(jiān)測模式下進行測定，以測得的目標物與其對應內(nèi)標的峰面積比為縱坐標，以相應的濃度比為橫坐標，繪制標準曲線；

S4，采用與步驟S3相同的方法檢測步驟S1中得到的待檢測液；

S5，將步驟S4中得到的待測樣品多反應監(jiān)測色譜圖與步驟S3中得到的標準樣品多反應監(jiān)測色譜圖進行比較，根據(jù)高效液相色譜-質(zhì)譜獲得的保留時間和特征離子鑒定植物激素的種類，根據(jù)待測樣品色譜峰面積結(jié)合標準曲線，即可得待測樣品中各植物激素的含量；

其中，所述植物激素包括吲哚-3-乙酸、吲哚-3-乙酸甲酯、吲哚-3-丁酸、吲哚-3-甲醛、吲哚-3-甲酸、異戊烯腺嘌呤、反式玉米素、順式玉米素、二氫玉米素、茉莉酸甲酯、茉莉酸、二氫茉莉酸、茉莉酸-異亮氨酸、水楊酸、脫落酸、赤霉素1、赤霉素3、赤霉素4、赤霉素7、赤霉素9、赤霉素15、赤霉素19、赤霉素20、赤霉素24、赤霉素53；

步驟S3中液相色譜的條件為：

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18柱；

流動相：流動相A為含有體積比為0.04％乙酸的超純水溶液，流動相B為含有體積比為0.04％的乙酸的乙腈溶液；流速為0.35mL/min；柱溫為40℃；進樣量為2μL；

梯度洗脫程序為：

時間/min	流動相A	流動相B
0	95	5
1	95	5
8	5	95
9	5	95
9.1	95	5
12	95	5

步驟S3中質(zhì)譜條件為：采用ESI源，溫度為550℃，正離子模式下質(zhì)譜電壓為5500V，負離子模式下質(zhì)譜電壓為-4500V,氣簾氣為35psi。