[發明專利]一種快速提取生物DNA的樣品處理方法、提取試劑盒及提取裝置

在審

• 申請號: 202011070134.2
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112251431A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 張懷遠;張俊峰;丁瑋云
• 申請（專利權）人: 漢遠化生醫國際科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12M1/00;C12M1/36;B02C23/18;G16B30/00
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本發明提供一種生物樣品處理方法，用于生物組織DNA的快速提取，包括：樣品的簡單處理后，經過研磨儀的研磨，把處理后的生物組織樣品轉入DNA裂解液，加入異丙醇形成納米DNA，轉入DNA微柱，清洗和洗脫。本發明提供的一種生物樣品處理方法，用于生物組織DNA的快速提取，可大大縮短操作時間，簡化操作步驟，提高實驗效率，且不使用有毒試劑，有利于操作者健康，減少對環境的破壞。

【技術領域】

本發明屬于生物工程技術領域，具體地涉及一種生物組織DNA快速提取樣品處理方法、提取試劑盒及提取裝置。

【背景技術】

隨著基因組測序技術的發展，生物基因組的序列、結構和功能研究飛速發展，而獲得高純度、高含量和高完整度的生物基因組DNA是基因組測序技術得以應用的首要前提。

傳統的生物基因組DNA提取方法主要有CTAB和SDS法，提取步驟主要包括生物組織在液氮保護下研磨或者在Protein K處理下，以及之后的細胞裂解、去除雜質、DNA沉淀、漂洗和洗脫等過程。其主要是以CTAB或SDS等去污劑對細胞進行裂解后，釋放出細胞中的基因組 DNA；再通過氯仿和苯酚抽提或高鹽沉淀的方法，去除蛋白質、多酚和多糖等雜質；然后在提取的上清液中加入適量體積的無水乙醇、異丙醇或PEG等有機溶劑將DNA沉淀或吸附在硅膠柱、離子交換柱等介質上；最后用漂洗液進行漂洗后，用低濃度鹽溶液溶解或從介質上洗脫下來。

專利文獻CN 110592072A公開了一種植物基因組DNA的提取方法及其應用，包括在液氮保護下進行生物組織的研磨，并將生物組織粉末加入65℃的CTAB裂解液中溫育40分鐘，之后進行DNA抽提，全部操作時間超過2.5小時，并且需要用到β-巰基乙醇等有毒物質。

專利文獻CN 110358762A公開了一種提取植物葉片基因組DNA的方法，包括將植物葉片放入多通道均質器中破碎，在裂解液中65℃溫育45分鐘，再通過磁珠法提取DNA，全部操作時間不少于1小時，并且需要β-巰基乙醇和鹽酸胍等有毒物質，對于儀器的要求較復雜。

專利文獻CN 110592072 A公開了一種植物基因組DNA的提取方法及其應用，包括在液氮保護下進行植物組織的研磨，并將植物組織粉末加入含有SDS的裂解液種中，在65℃溫育30～ 50分鐘。還要在-20℃放置5～10分鐘，之后進行DNA抽提，全部操作時間大約2小時，并且需要用到β-巰基乙醇的有毒物質。

專利文獻CN 106754889 A公開了從一種中藥植物組織提取高質量基因組DNA的方法，包括在低溫下對植物組織細胞核反復抽提。然后，加入蛋白酶K和SDS裂解液并37℃消化過夜，耗時太長。而且使用了酚和氯仿有毒物質。

專利文獻CN 104694530 A公開了一種用96孔板的研磨儀從小麥葉片組織提取高質量基因組DNA的方法，包括低溫樣品處理，研磨，然后用提取試劑完成DNA的提取過程。但是樣品處理過程太耗時：20～28h，提取過程也非常費時，超過2h，而且還使用有毒物質，如：氯仿，苯酚等。

通過上述專利文獻可見，現有的生物組織DNA提取方法普遍存在操作時間長(普遍超過 1小時甚至2小時)、使用有毒物質(酚、氯仿、β-巰基乙醇)等問題，操作時間長會引起DNA的降解且浪費實驗人員的寶貴時間、降低實驗效率；使用有毒物質則會對操作者身心健康造成傷害，且廢物排放對環境有不利影響，后期處理成本大，不符合可持續發展的需要。

【發明內容】

本發明的目的在于克服上述現有技術中存在的不足，提供一種能夠快速提取生物組織DNA 的樣品處理方法，以及用于實施該方法的試劑盒和提取裝置。

為實現上述目的，本發明提供一種生物組織DNA快速提取的樣品處理方法，包括以下步驟：

(a)將將簡單處理后的生物組織加入研磨裝置或研磨儀；

(b)對所述生物組織進行充分的研磨；