[發明專利]基于免疫組化空間電化學檢測樣品中抗原含量的方法

有效

• 申請號: 202011069520.X
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112213482B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 王平;秦潔玲;王佳
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N27/48
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種基于免疫組化電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：將電化學信號修飾到抗體上，將電化學信號修飾后的抗體與待測抗原含量的樣品混合，進行抗原抗體的結合，使用電化學儀檢測與抗原結合的抗體的電化學信號或檢測未與抗原結合的抗體電化學信號，將測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得待測樣品中抗原的含量；

當待測抗原含量的樣品為待測抗原含量的組織時，將待測抗原含量的組織與電化學信號修飾后的抗體混合后，共孵育，進行抗原抗體的結合，去除待測抗原含量的組織，使用差分脈沖伏安法檢測未結合的抗體電化學信號，將測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得待測抗原含量的組織中抗原的含量；

當待測抗原含量的樣品為待測抗原含量的細胞時，將待測抗原含量的細胞與電化學信號修飾后的抗體混合后，共孵育，進行抗原抗體的結合，離心去除未結合的抗體，使用差分脈沖伏安法檢測細胞表面電化學信號，將測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得待測抗原含量的組織中抗原的含量；

使用電化學儀檢測電化學信號時，使用的電極為表面修飾有樹枝狀金和導電高分子的電極。

2.根據權利要求1所述基于免疫組化電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，

當使用電化學儀檢測與抗原結合的抗體的電化學信號時，測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得與抗原結合的抗體的含量，根據與抗原結合的抗體的含量，計算得出檢測樣品中抗原含量；

當使用電化學儀檢測未與抗原結合的抗體電化學信號時，將測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得未與抗原結合的抗體的含量，根據與待測抗原樣品混合之前的電化學信號修飾的抗體的總量計算與抗原結合的抗體的含量，根據與抗原結合的抗體的含量，計算得出檢測樣品中抗原含量。

3.根據權利要求1所述基于免疫組化電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，電化學信號的標準曲線是通過以下方法制作的：使用電化學儀檢測三元電池法下不同濃度的電化學信號，以濃度的log值為X軸，所對應的電流值為Y軸，制作線性曲線，即為電化學信號的標準曲線。

4.根據權利要求1所述基于免疫組化電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，通過使用不同電化學信號修飾不同抗體，可以實現相應抗原的同時檢測。

5.根據權利要求1所述基于免疫組化電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，所述電化學信號選自二茂鐵或量子點，所述量子點選自ZnS、CdS、CdTe或PbS。

6.一種基于免疫組化空間電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.將電化學信號修飾到抗體上；

b.將電化學信號修飾后的抗體加入待測組織中，共孵育，進行抗原抗體的結合；

c.去除待測抗原含量的組織，使用差分脈沖伏安法檢測未結合的抗體電化學信號；

d.將測得的電化學信號跟電化學信號的標準曲線進行比較，計算獲得待測抗原含量的組織中抗原的含量；

e.提取其他部分區域組織，重復上述檢測方法，獲得不同區域組織的電化學信號值；

f.將不同區域得出的電化學信號值轉化為熱圖，通過與HE(蘇木素-伊紅)圖組合實現空間免疫組化電化學檢測；

使用電化學儀檢測電化學信號時，使用的電極為表面修飾有樹枝狀金和導電高分子的電極。

7.根據權利要求6所述基于免疫組化空間電化學檢測樣品中抗原含量的方法，其特征在于，步驟f中，將不同區域得出的電化學信號值轉化為熱圖是空間檢測的常規方法，根據熱圖中點的顏色的變化，直觀表達出不同區域組織中抗原含量的多少，抗原高表達的地方熱圖中點的顏色越深，抗原低表達的地方熱圖中點的顏色越淺。