[發明專利]萬氏潛蠅姬小蜂孤雌產雌品系和兩性品系的雙重PCR檢測方法

有效

• 申請號: 202011067344.6
• 申請日: 2020-10-06
• 公開（公告）號: CN112522419B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 劉萬學;杜素潔;葉福宇;郭建洋;程鑫斐;潘立婷;萬方浩
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所(普通合伙) 11039
• 代理人: 劉江良

本發明涉及萬氏潛蠅姬小蜂兩種品系快速PCR檢測方法及所用的特異性COI引物。該方法根據萬氏潛蠅姬小蜂兩種品系線粒體DNA特異序列，通過特異性位點設計特異性引物，最終建立了一對萬氏潛蠅姬小蜂的特異性檢測COI引物。所述引物對包括引物DWAlgdCF：5’?TTTGGTTTAAT CTCTCAC?3’；和DWlgdCR：5’?ATGTAAAACAATATC AATTGAAGA?3’。一步雙重PCR引物為通用引物COISF、特異性引物DWAlgdCF和特異性引物DWlgdCR。成功建立的雙重PCR體系能夠對萬氏潛蠅姬小蜂兩性品系的卵、幼蟲、蛹、雌成蟲和雄成蟲DNA，及兩種品系在同一蟲態下的混合DNA為模板亦有良好的檢測效果。本方法是在難以從形態準確鑒定兩種品系的背景下，能夠快速有效的鑒定出其中一種品系，應用該方法，大大節約了時間和資金，并能獲得可靠的結果。

技術領域

本發明涉及昆蟲分子生物學鑒定領域，具體涉及萬氏潛蠅姬小蜂兩種品系的雙重PCR特異性檢測技術。

技術背景

2015年7月，我們在青海省西寧市的露天種植的豌豆上發現豌豆彩潛蠅上的一種優勢寄生蜂，經過傳統形態分類學和分子鑒定方法比較，確定其為新種并命名為萬氏潛蠅姬小蜂Diglyphus wani，并且驗證了該蜂具有孤雌產雌特性(Female-producingparthenogenesis)和3種寄主致死(host-killing)行為：寄生(parasitism)致死、寄主取食(host feeding)致死、直接叮蟄致死(host stinging)(Ye et al.,2018)。田間調查結果顯示，該蜂的寄主種類包括三葉草斑潛蠅Liriomyza trifolii、美洲斑潛蠅L.sativae、南美斑潛蠅L.huidobrensis、番茄斑潛蠅L.bryoniae、豌豆彩潛蠅Chromatomyia horticola和蔥斑潛蠅L.chinensis等，而這些潛葉蠅是我國重要的蔬菜和花卉上的害蟲，尤其是4種外來斑潛蠅(前4種)的入侵嚴重威脅著我國農產品的正常生產與國際貿易或運輸(Chen XX.,Lang F Y.,Xu Z H.,et al.The occurrence of leafminers and their parasitoidson vegetables and weeds in Hangzhou area,Southeast China.Biological Control,2003,48(5):515-527.；Kang L.,Chen B.,Wei J N.,et al.Roles of Thermaladaptation and chemical ecology in Liriomyza distribution and control.AnnualReview of Entomology,2009,54(1):127-145.；劉萬學,王文霞,王偉,等.潛蠅姬小蜂屬寄生蜂對潛葉蠅的控害特性及應用.昆蟲學報,2013(4):427-437.；Cheng X Q.,Cao F Q.,Zhang Y B.,et al.Life history and life table of the host-feeding parasitoidHemiptarsenus varicornis(Hymenoptera:Eulophidae).Applied Entomology andZoology,2017,52(2):287-293.；Gao Y.,Reitz S.,Xing Z.,et al.A decade of aleafminer invasion in China:lessons learned.Pest Management Science,2017,73(9):1775-1779.；Ye F Y.,Zhu C D.,Yefremova Z.,et al.Life history andbiocontrol potential of the first female-producing parthenogenetic species ofDiglyphus(Hymenoptera:Eulophidae)against agromyzid leafminers.ScientificReports,2018,8(1):3222.)。