[發(fā)明專利]SlBBX20基因在調(diào)控番茄灰霉病抗性方面的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011067333.8
• 申請日: 2020-10-06
• 公開（公告）號: CN112195186B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王濤濤;羅丹;熊程;孫文慧;張小燕;葉志彪;張俊紅;楊長憲;李漢霞
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H6/82
• 代理公司: 武漢藍(lán)寶石專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 方菲

本發(fā)明涉及SlBBX20基因在調(diào)控番茄灰霉病抗性方面的應(yīng)用，通過提高SlBBX20在番茄中的表達(dá)來降低番茄的灰霉病抗性，通過降低或消除SlBBX20在番茄中的表達(dá)來提高番茄的灰霉病抗性。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：(1)利用基因編輯技術(shù)獲得灰霉病抗性強(qiáng)的植株，較傳統(tǒng)的育種方法更經(jīng)濟(jì)、有效，是一種創(chuàng)建抗病材料的好方法，大大縮短了育種年限；(2)與傳統(tǒng)防治方法相比，本發(fā)明的SlBBX20敲除株系對灰霉病的抗性顯著增強(qiáng)，可以減少農(nóng)藥的使用量，保護(hù)了環(huán)境；(3)提供了降低灰霉病抗性的植株及方法，為后續(xù)灰霉病的研究及防治提供素材。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及SlBBX20基因在調(diào)控番茄灰霉病抗性方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

灰霉菌是一種廣譜性的病原真菌，其寄主可達(dá)二百多種，并且可以入侵植物的花、莖、葉和果實(shí)等器官，每年對世界果蔬的產(chǎn)量和品質(zhì)造成巨大威脅。灰霉菌是一種腐生型病原菌，入侵植物后會分泌一些有毒物質(zhì)并利用自身防御機(jī)制來破壞宿主細(xì)胞，獲取營養(yǎng)，進(jìn)行自身繁殖。

灰霉病作為世界第二大真菌性病害，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了很大的損失。國內(nèi)對灰霉菌的防治大多數(shù)還停留在針對灰霉菌的生物學(xué)特性研究方面，生產(chǎn)上采用農(nóng)業(yè)防治、生物防治、化學(xué)防治的方法。例如，選用無病床育苗、高溫悶棚、合理施肥、加強(qiáng)栽培管理，實(shí)施輪作換茬和生態(tài)防治等防治方法雖然有一定效果，但是受到多方面因素的影響，效果不是太好，生產(chǎn)上則主要以化學(xué)防治為主。但化學(xué)防治不僅影響我們的食品品質(zhì)，還會對環(huán)境造成危害，因此培育抗病品種尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了SlBBX20基因在調(diào)控番茄灰霉病抗性方面的應(yīng)用。

具體技術(shù)方案如下：

SlBBX20基因在調(diào)控番茄灰霉病抗性中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用SlBBX20基因調(diào)控番茄灰霉病抗性，可制備不同灰霉病抗性的植株。

進(jìn)一步，通過降低或消除SlBBX20在番茄中的表達(dá)來提高番茄的灰霉病抗性；所述SlBBX20基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

進(jìn)一步，通過在番茄中轉(zhuǎn)入選自所述包含SlBBX20基因ORF的片段提高所述SlBBX20基因的表達(dá)水平，所述包含SlBBX20基因ORF的片段序列如SEQ ID NO.2所示。

進(jìn)一步，通過基因編輯使所述SlBBX20基因發(fā)生突變，敲除番茄中的所述SlBBX20基因。

一種番茄抗灰霉病基因，其不同之處在于，所述番茄抗灰霉病基因由上述的SlBBX20基因發(fā)生突變制備而得，所述SlBBX20基因如SEQ ID NO.1所示。

進(jìn)一步，所述SlBBX20基因發(fā)生突變的片段包括SlBBX20基因第一靶點(diǎn)片段和/或SlBBX20基因第二靶點(diǎn)片段，所述SlBBX20基因第一靶點(diǎn)片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述SlBBX20基因第二靶點(diǎn)片段序列如SEQ ID NO.4所示。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了可提高番茄灰霉病抗性的SlBBX20突變基因。

一種SlBBX20基因敲除載體，其不同之處在于，所述SlBBX20基因敲除載體包括SlBBX20基因第一靶點(diǎn)片段及SlBBX20基因第二靶點(diǎn)片段，所述SlBBX20基因第一靶點(diǎn)片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述SlBBX20基因第二靶點(diǎn)片段序列如SEQ ID NO.4所示。

進(jìn)一步，利用靶點(diǎn)引物擴(kuò)增出含有所述SlBBX20基因第一靶點(diǎn)片段及所述SlBBX20基因第二靶點(diǎn)片段的待轉(zhuǎn)入基因片段，將所述待轉(zhuǎn)入基因片段插入線性化的轉(zhuǎn)入載體中，進(jìn)行連接后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，經(jīng)過抽提后得到所述重組載體。