[發(fā)明專利]一種背蛇生的人工高效繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011065665.2
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112167060B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃衡宇;張愛麗;徐福榮;席銀凱
• 申請（專利權(quán)）人: 云南中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53216
• 代理人: 楊釗霞

本發(fā)明公開了一種背蛇生的人工高效繁殖方法，包括將消毒滅菌處理后的背蛇生帶芽莖段外植體接種于培養(yǎng)基A中培養(yǎng)，在光照度1500?2000lx，光照時間10h/d，溫度控制在22±1℃的條件下進(jìn)行啟動增殖培養(yǎng)，35d后可有3.57的增殖系數(shù)。將材料剪為包含2?3個節(jié)的莖段接入培養(yǎng)基B中培養(yǎng)，45d后形成既有基部不定叢芽又有上部腋芽生長的簇狀叢生系統(tǒng)，增殖系數(shù)達(dá)10.0以上。待增殖叢生芽高3?4cm時，單苗接入培養(yǎng)基B中培養(yǎng)45d獲得苗壯根粗的生根苗，然后將該生根苗移栽。本發(fā)明成本低、周期短、試管苗質(zhì)量和成活率高，為保護(hù)野生資源、優(yōu)質(zhì)種苗繁育提供了技術(shù)支撐，可在短時間內(nèi)生產(chǎn)基因型背景一致的優(yōu)良種苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中草藥繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種背蛇生的人工高效繁殖方法。

背景技術(shù)

背蛇生(Aristolochia tuberosa C.F.Liang et S.M.Hwang)為馬兜鈴科(Aristolochiaceae)馬兜鈴屬(Aristolochia)多年生草質(zhì)藤本，又名毒蛇藥、避蛇生，朱砂蓮等，為我國特有藥用植物，主要分布于廣西、云南、貴州和四川等省份，生于海拔150-1600m石灰?guī)r山上或山溝兩旁灌叢中。背蛇生塊根入藥，味苦、辛，性寒，有小毒，具有消炎消腫，清熱解毒、散血止痛之效，民間用藥主要治療胃炎、胃潰瘍、癰瘍腫毒、牙痛、喉痛、吐血、蛇傷有較佳的療效。

隨著大健康產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，背蛇生不再僅限于民間的中醫(yī)藥應(yīng)用。現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)和臨床研究表明，背蛇生富含馬兜鈴酸和朱砂蓮甲素等抑制金色葡萄球菌的生長，提高細(xì)胞免疫、抗癌，治療多種慢性病的活性物質(zhì)，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。目前，由于生境日益惡劣，背蛇生已瀕于滅絕，其資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)外市場需求。背蛇生通常以其種子為繁殖單位。但種子萌發(fā)率低，實生苗生長緩慢且生物量較小、后代變異大，并受到萌發(fā)季節(jié)的限制，難以進(jìn)行規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化(基因型背景一致)種植和高藥效品種的大面積推廣。

因此，需要尋求一種新的成本低、時間短、質(zhì)量和成活率高，且能將優(yōu)良性狀固定下來的高效人工繁殖方法來擴(kuò)大背蛇生種苗的繁殖量，進(jìn)行其高品質(zhì)種苗的工廠化生產(chǎn)，以滿足種植需求。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上問題，本發(fā)明提供了一種背蛇生的人工高效繁殖方法，以解決背蛇生種子繁殖萌發(fā)率低，實生苗生長緩慢且生物量較小、后代變異大，并受到萌發(fā)季節(jié)的限制，難以進(jìn)行規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化種植，高藥效品種難以大面積推廣的問題。

根據(jù)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種背蛇生的人工高效繁殖方法，將消毒滅菌處理后的帶節(jié)莖段外植體經(jīng)啟動培養(yǎng)、基莖叢生芽發(fā)生和增殖、不定根誘導(dǎo)、馴化移栽，包括如下步驟：

步驟1：外植體的獲取

選擇生長勢好、無病蟲害、無畸形的健壯植株，取其莖尖下含2-3節(jié)莖段；

步驟2：消毒處理

將步驟1獲取的帶節(jié)莖段進(jìn)行消毒處理；

步驟3：啟動培養(yǎng)

將經(jīng)過步驟2消毒滅菌好的帶節(jié)莖段為材料，接入培養(yǎng)基A中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下進(jìn)行腋芽萌發(fā)誘導(dǎo)；

步驟4：基莖叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)

在步驟3培養(yǎng)基A中繼代增殖2代時，將步驟3中培養(yǎng)的增殖苗轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基B中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下進(jìn)行基莖叢生芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)；

步驟5：

取步驟4叢芽中的健壯主苗接種于培養(yǎng)基C中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下獲得苗壯根粗的生根苗；

步驟6：煉苗和移栽。

進(jìn)一步地，步驟3中，所述A培養(yǎng)基包括以下原料：

MS培養(yǎng)液