[發明專利]環肽抗生素纈氨霉素高產菌株及其應用

有效

• 申請號: 202011064961.0
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112159777B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 陳小龍;張棟;陸躍樂;朱林江;吳楚天
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/04;C07K11/02;C07K1/16;C12R1/465
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

1.一株環肽抗生素纈氨霉素高產菌株——鏈霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp.IFE-v1m38），保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號CGMCC No. 20046，保藏日期：2020年06月08日。

2.權利要求1所述鏈霉菌IFE-v1m38在微生物發酵制備油菜菌核病菌抗菌劑中的應用。

3.權利要求1所述鏈霉菌IFE-v1m38在微生物發酵制備纈氨霉素（Valinomycin）中的應用，所述纈氨霉素結構如下式所示：

。

4.一種利用權利要求1所述鏈霉菌IFE-v1m38微生物發酵制備纈氨霉素的方法，其特征在于所述方法包括：將鏈霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp. IFE-v1m38）接種至發酵培養基，在溫度26~30 ℃、轉速 150~500 rpm、通氣量0~4.0 vvm條件下，氨水調控pH 7.0~7.4，進行發酵培養48~192 h，獲得含有纈氨霉素的發酵液、經分離純化獲得所述纈氨霉素。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述發酵培養基組成如下：黃豆餅粉 5~30.0g/L，可溶性淀粉 5~20.0 g/L，葡萄糖 5~30 g/L，胰蛋白胨1~10.0 g/L，酵母提取物1~10.0g/L，牛肉浸膏 0.5~5.00 g/L，NaCl 0.1~5.0 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~1.5 g/L，K₂HPO₄·3H₂O0.1~1.5 g/L，CaCO₃ 0.5~5.0 g/L，FeSO₄·7H₂O 0.001~0.02 g/L，0.1~3.0 ‰消泡劑，121℃滅菌10~20min。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述鏈霉菌 IFE-v1m38（Streptomyces sp.IFE-v1m38）先接種至種子培養基進行培養獲得種子液，種子液再接種至發酵培養基進行發酵培養，所述種子培養基組成如下：酵母提取物5~20.0 g/L，牛肉膏 1~15.0 g/L， NaCl0.1~2.0 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~2.0 g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.1~2.0 g/L， FeSO₄·7H₂O 0.001~0.02 g/L

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述分離純化方法如下：含有纈氨霉素的發酵液加1~3‰ 絮凝劑聚氯化鋁，真空泵抽濾固液分離，得到菌絲體用純甲醇反復浸泡抽提3~5次，抽提物濃縮后，再用乙酸乙酯反復萃取2~4次、飽和NaCl溶液水洗1~3次、分液漏斗靜置分層，真空旋轉蒸發儀濃縮有機相，樣品用真空干燥儀除水；采用200~300目的硅膠柱層析，樣品的上樣量與硅膠用量比例為1.0 ：30~60，用0~100 %的MeOH-CHCl₃梯度洗脫，選擇有活性的組分通過制備TLC進一步分離純化，展開劑為MeOH：CHCl₃=20:80；再采用Shimadzu LC-20AP制備液相分離純化收集的活性物質，柱層析，以甲醇：1 ‰ 三氟乙酸水溶液= 90:10為流動相，柱溫25℃，檢測波長210 nm，流速為2.0 mL/min；收集的活性組分在真空旋轉蒸發儀濃縮和冷凍干燥后得到白色固體，即為所述纈氨霉素。