[發明專利]NT5C3A作為結核病診斷分子標識的用途在審
| 申請號： | 202011058725.8 | 申請日： | 2020-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN112143798A | 公開（公告）日： | 2020-12-29 |
| 發明（設計）人： | 金奇;張笑冰;劉立國 | 申請（專利權）人： | 中國醫學科學院病原生物學研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12Q1/6851;G01N33/573 |
| 代理公司： | 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130 | 代理人： | 王為 |
| 地址： | 100730*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | nt5c3a 作為 結核病 診斷 分子 標識 用途 | ||
1.檢測分子標記物NT5C3A表達水平的試劑在制備診斷結核病的試劑盒的應用。
2.檢測NT5C3A蛋白水平改變在制備診斷結核病試劑盒的應用。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，檢測分子標記物NT5C3A表達水平方法為熒光定量PCR法。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，檢測分子標記物NT5C3A表達水平的試劑制備診斷活動性結核病的試劑盒中的應用。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用包括用于區分活動性結核病患者、結核潛伏感染以及非活動性肺結核非潛伏感染者。
6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述結核病為肺結核或肺外結核。
7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，該試劑盒還包括如下組分：
CD15+細胞富集磁珠及相關試劑，細胞總RNA提取分離柱及相關試劑，cDNA合成逆轉錄酶及相關試劑，NT5C3A序列擴增特異性引物及實時熒光定量PCR相關試劑。
8.NT5C3A在制備結核病診斷標記物的產品中的應用。
9.NT5C3A在制備診斷結核病的醫療器械中的應用，所述的診斷結核病的醫療器械以NT5C3A作為診斷分子標記物。
10.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：
(1)全血樣本處理
吸取0.8ml混勻全血到5ml流式管中，以1：2的比例向流式管中加入1.6mL的4℃預冷的分離液，吹吸混勻；加入CD15+磁珠并迅速向稀釋好的血液中加入一份磁珠，蓋緊蓋子，將流式管妥善安置在Hula Mixer上，4℃，8rpm旋轉孵育20min，
(2)磁性分離
a、孵育好的細胞，瞬時離心，在磁力架上靜置2min，小心吸去上清；
b、1.6mL分離液，輕輕吹勻后轉移至對應2mL蛋白低吸附管，磁力架上靜置2min，吸去上清；
c、力架上取下，加入1.6mL分離液，輕輕吹勻，磁力架上靜置2min，吸去上清，重復1次；
d、350μL的Buffer RLT裂解細胞，渦旋震蕩1min，4℃放置備用；
(3)總RNA提取
采用RNeasy Plus Mini Kit對磁珠分選的中性粒細胞總RNA進行提取；
(4)cDNA的合成
取細胞總RNA，采用SuperScriptTMIV VILOTMMaster Mix進行反轉錄，得到樣本cDNA，
(5)實時熒光定量PCR檢測NT5C3A基因的相對表達量
采用步驟(4)中制備的cDNA為模板，對NT5C3A特異引物對或內參引物對進行實時定量PCR，進而得到各個樣本模板中NT5C3A基因的相對表達量。
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