[發(fā)明專利]脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液以及脂肪間充質(zhì)干細胞凍存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011057613.0
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112075418B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈智勇;王功偉;柳運猛;張印
• 申請（專利權(quán)）人: 惟力維斯（上海）醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 上海領(lǐng)洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31292
• 代理人: 羅曉鵬

本發(fā)明屬于干細胞技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液以及脂肪間充質(zhì)干細胞凍存方法。本發(fā)明提供的脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液，包括如下組分及其重量份數(shù)組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基80～120份、低溫保護劑5～10份，L?巖藻糖2～6份，硫辛酸1～5份，還原型谷胱甘肽0.1～2份。本發(fā)明提供的脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液不含有動物血清，安全性高，成本低，且制備方法簡單，與常規(guī)的凍存方法相比，采用本發(fā)明脂肪間充質(zhì)干細胞的凍存方法凍存的細胞可明顯減少凍存液對細胞的損傷，復(fù)蘇后細胞回收率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細胞技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液以及脂肪間充質(zhì)干細胞凍存方法。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細胞(MSC，MesenchymalStemCells)是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細胞，MSCs最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，是多能干細胞，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。因此MSCs具有廣闊的臨床應(yīng)用前景，是細胞替代治療和組織工程的首選種子細胞。

脂肪間充質(zhì)干細胞(Adipose-derived MesesnchymalStemCells,ADMSCs)是指存在于脂肪組織中的MSCs，具有自我更新和多向分化的潛能，可以分化成骨細胞、軟骨細胞脂肪細胞等。由于脂肪組織幾乎遍布動物全身，在整個聲明過程中有極強的可塑性。ADMSCs具有很多優(yōu)點：第一，部分避免了倫理及法律上的問題；第二，來源廣泛，從醫(yī)學(xué)角度來說，吸脂術(shù)與抽骨髓相比，從腹部獲取脂肪較為容易，給別人帶來的損傷也較小。第三，ADMSCs具有多向分化潛能，在不同條件下可被誘導(dǎo)分化為成骨細胞軟骨細胞脂肪細胞等，中胚層細胞也可向神經(jīng)細胞、肝細胞等其他胚層分化；第四，ADMSCs表面分子標記與其他組織來源的MSCS相似；第五，脂肪來源的MSCs與骨髓來源的MSCs，相比具有更長的培養(yǎng)時間以及更高的增殖能力。

目前現(xiàn)有技術(shù)中，脂肪間充質(zhì)干細胞的細胞凍存保護液配方一種是以二甲基亞砜和血清為主要成分，另一種是以培養(yǎng)基、二甲基亞砜和血清為主要成分。此外還有一些配方是在上述兩種配方的基礎(chǔ)上添加其他保護細胞的物質(zhì)。中國專利申請CN 109644982 A公開了一種用于脂肪干細胞的凍存方法，所述細胞凍存液由90％胎牛血清FBS和10％二甲基亞砜DMSO所組成。雖然該凍存液使用較為普遍，但其主要成分血清具有成分復(fù)雜，質(zhì)量不穩(wěn)定，有被動物病原污染的可能性，具有價格昂貴，成本較高等缺點。中國專利申請CN106386783A公開了一種間充質(zhì)干細胞的凍存保護液，所述凍存保護液包括1640培養(yǎng)液69％，二甲基亞砜10％，人血清白蛋白10％，硫辛酸10％，成纖維細胞生長因子1％。所述的二甲基亞砜雖然是凍存細胞時常用的保護劑，但是二甲基亞砜會對細胞產(chǎn)生毒性作用，會對凍存的干細胞造成不可逆的損傷，導(dǎo)致復(fù)蘇后細胞回收率及細胞活率較低。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)中脂肪間充質(zhì)干細胞的凍存液存在成本較高、效果均不理想等普遍問題，如何最大限度的避免干細胞凍存與復(fù)蘇過程中的損傷，提高復(fù)蘇后細胞回收率及細胞活率成為亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液以及脂肪間充質(zhì)干細胞凍存方法。本發(fā)明提供的脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液，不含有動物血清，安全性高，成本低，且制備方法簡單，與常規(guī)的凍存方法相比，采用本發(fā)明脂肪間充質(zhì)干細胞的凍存方法凍存的細胞可明顯減少凍存液對細胞的損傷作用，復(fù)蘇后細胞回收率高。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種脂肪間充質(zhì)干細胞凍存液，包括如下組分及其重量份數(shù)組成：基礎(chǔ)培養(yǎng)基80～120份、低溫保護劑5～10份、L-巖藻糖2～6份、硫辛酸1～5份和還原型谷胱甘肽0.1～2份。