[發明專利]一種β2-GP1改構蛋白及其構建方法、應用

在審

• 申請號: 202011057053.9
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112250759A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 秦楓;姚俊騰;季純宇;任偉超;張小飛;顏松;周玥;黃敬雙;張偉;萬文琴;鮮靜
• 申請（專利權）人: 四川攜光生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/775
• 分類號: C07K14/775;C12N15/12;C12N15/866;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 史麗紅

1.一種β2-GP1改構蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根據權利要求1所述的一種β2-GP1改構蛋白，其特征在于，包含結構域1蛋白區段、結構域4蛋白區段和結構域5蛋白區段。

3.一種編碼如權利要求1所述的一種β2-GP1改構蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.β2-GP1改構蛋白的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、重組全基因合成序列：依次連接結構域1、結構域4、結構域5蛋白區段的核苷酸序列獲得目的基因；

S2、構建重組質粒：將步驟S1中獲得的重組全基因合成序列構建至表達載體，獲得重組質粒；

S3、一次轉染：將步驟S2中的重組質粒轉染宿主細胞，獲得重組桿粒；

S4、二次轉染：將步驟S3中的重組桿粒再次轉染宿主細胞，獲得第一代的桿狀病毒；

S5、表達：將步驟S4中的第一代的桿狀病毒進行表達；

S6、獲得改構蛋白：將步驟S5中表達得到的細胞培養物進行純化，獲得改構蛋白。

5.根據權利要求4所述的一種β2-GP1改構蛋白的構建方法，其特征在于，所述步驟S1重組全基因合成序列過程中包含一個單位的結構域1蛋白區段的核苷酸序列、一個單位的結構域4蛋白區段的核苷酸序列和一個單位的結構域5蛋白區段的核苷酸序列。

6.根據權利要求4所述的一種β2-GP1改構蛋白的構建方法，其特征在于，所述步驟S1中重組全基因合成序列中還包括柔性肽基因序列、真核KOZAK序列、蜂毒信號肽序列、Avi標簽序列和His標簽序列，真核KOZAK序列、蜂毒信號肽序列、結構域1蛋白區段的核苷酸序列、柔性肽基因序列、結構域4蛋白區段的核苷酸序列、柔性肽基因序列、結構域5蛋白區段的核苷酸序列、Avi標簽序列和His標簽序列依次相連。

7.根據權利要求4所述的一種β2-GP1改構蛋白的構建方法，其特征在于，步驟S1中重組全基因合成序列刪除了結構域4中的Gly237及Gly242殘基，刪除了結構域5中的Pro343及Pro358殘基。

8.根據權利要求4所述的一種β2-GP1改構蛋白的構建方法，其特征在于，所述步驟S2構建重組質粒中的表達載體包括昆蟲細胞表達載體和/或桿狀病毒表達載體，所述步驟S3一次轉染時的宿主細胞包括大腸桿菌宿主和/或動物性細胞宿主。

9.如權利要求1-2任一所述的一種β2-GP1改構蛋白在試劑盒、疫苗或診斷抗原中的應用。

10.一種β2-GP1改構蛋白檢測試劑盒制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、磁珠試劑的制備：將權利要求1所述改構蛋白質使用生物素進行標記，標記完成后，通過生物素與鏈酶親的反應，將生物素化的改構蛋白質偶聯到鏈酶親和素磁珠上，并加入0.1mg/mL的心磷脂，37℃混合反應24h后，作為試劑盒中的組分M；

S2、分別在鼠抗人IgG、鼠抗人IgM及鼠抗人IgA三種抗體上標記堿性磷酸酶(AP)，將標記完成的IgG/IgM/IgA-AP，使用相同抗體的濃度，混合為同一反應液，作為試劑盒中的組分R2。