[發明專利]用于鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌的分子標記、檢測引物和檢測方法

有效

• 申請號: 202011054958.0
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112029885B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 張淑紅;黃遠斌;吳清平;張菊梅;楊廣珠;丁郁;薛亮;陳謀通;王涓;曾海燕;葉青華;韋獻虎;古其會;張友雄
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/225;C12R1/23
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了用于鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌的分子標記、檢測引物和檢測方法。所述的分子標記的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、2、3、4、5或6所示。本發明能有效鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌，具有快速、準確、經濟和操作簡單等優點，便于食品企業和檢驗機構使用。

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，具體涉及用于鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌的分子標記、檢測引物和檢測方法。

背景技術：

瑞士乳桿菌是乳酸菌中營養缺陷最高的菌種之一，具有強大的蛋白水解能力，其蛋白水解產物具有抗高血壓、消炎和抗癌等功能，是一種安全的益生菌。該菌能適應多種環境，包括高溫、低pH、低滲透壓、低氧等，比其他益生菌如雙歧桿菌和乳桿菌更適合制成益生菌制劑。瑞士乳桿菌可產生許多具有抑菌活性的多肽物質和有機酸，對致病菌具有較好的抑制作用，在食品保鮮、防腐和延長貨架期等方面起著重要的作用。瑞士乳桿菌是瑞士干酪和意大利干酪生產中的傳統用菌，對奶酪風味有重要影響。發酵乳桿菌多用于谷物類食品的發酵和豆豉的生產。此外，發酵乳桿菌是青貯飼料添加劑菌種，作為動物的飼料添加劑，具有提高豬營養物質消化率，改善胃腸道微生物菌系組成、腸道粘液蛋白表達以及腸道粘膜免疫功能。嗜酸乳桿菌是目前乳酸菌家族中具有較高研究價值的益生菌，被視為第三代酸乳發酵劑菌種，在乳品行業廣泛應用。嗜酸乳桿菌與其他益生菌混合發酵可改善酸奶風味。此外，嗜酸乳桿菌在腸道內定殖，能激活機體巨噬活性，誘發特異性和非特異性免疫反應,提高抗感染的能力。

目前這些乳桿菌鑒定主要采用通過生理生化鑒定試驗來完成，菌落特征觀察、接觸酶試驗、硝酸鹽還原試驗、精氨酸雙水解試驗、明膠液化、VP試驗、硫化氫試驗及各種糖醇類發酵試驗等，操作較煩雜，試驗周期較長。基質輔助激光解析電離飛行時間質譜儀(MALDI-TOF)在乳酸菌鑒定中具有較好的效果，但是儀器昂貴，難以在基層實驗室推廣應用。16S rDNA序列同源性分析作為乳酸菌鑒定已被廣泛應用，但是需要進對于同源性較高的乳桿菌近緣種無法準確區分，且需要進一步測序。Grazia和Yu等分別基于pepC、pepN和htrA以及hsp60、pheS和tuf基因PCR擴增測序，進行了瑞士乳桿菌和嗜酸乳桿菌鑒定和進化分析，這些方法有助于乳桿菌的區分，但是建立在有限的幾個管家基因基礎上。

發明內容：

本發明的第一個目的是提供一種用于鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌新的特異性分子標記。

本發明的鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌新的特異性分子標記，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1、2、3、4、5或6所示。

本發明的第二個目的是提供一種鑒定瑞士乳桿菌、發酵乳桿菌和嗜酸乳桿菌的鑒定引物組，其是以下8對引物中的一對以上的引物組合：

HP490315-helv5-F：5'-TTGTAGTTCACCGGGTTCACAT-3'

HP490315-helv5-R：5'-GCAATTGCTGGTGTGGTGAAT-3'；

Hp-helv2-F：5'-TATGCTTGCCACAAAGGTTCC-3'

Hp-helv2-R：5'-TAGCGGGAGCTGTAGCGATG-3'；

Fermentum_00905-5-F：5'-ACGACGTTCTCGGTGTCAAA-3'

Fermentum_00905-5-R：5'-TCGCCTGGGAAATCGAGATG-3'；

Fermentum-4hy-6-F：5'-CGGTAACAACGGTTTCGTCG-3'

Fermentum-4hy-6-R：5'-CAGCCAGGGTTAAGACGGTT-3'；