[發(fā)明專利]一種利用轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞制備轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)器的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011054930.7
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112143758A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃奔;張丹丹;劉權(quán)輝;朱少倩;葉升;覃梁珊;李夢梅;胡吉剛;謝小蓮
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué);廣西犇彭生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/65;C12N5/10;C12N5/077
• 代理公司: 天津企興智財知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12226
• 代理人: 馬倩倩

1.一種利用轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞制備轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)器的方法，其特征在于：包括如下步驟，

1)制備攜帶外源基因的轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞；

2)將步驟1)制備的攜帶外源基因的轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞注射到去除了乳腺芽的乳腺脂肪墊，注射細胞量為5×10⁴-1×10⁶個細胞；

攜帶外源基因的轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞的制備包括如下步驟，采取奶山羊耳尖組織進行分離培養(yǎng)獲得成纖維細胞GEFs；然后將慢病毒重組質(zhì)粒psin-Ef1a-GFP-puro與慢病毒包裝載體VSVG和NRF共轉(zhuǎn)染293T細胞，轉(zhuǎn)染48-72h后收集病毒懸液，用于感染山羊成纖維細胞；后續(xù)用嘌呤霉素進行篩選，獲得穩(wěn)定表達GFP的山羊成纖維細胞GFP-GEFs；再使用小分子化合物對GFP-GEFs進行誘導(dǎo)，獲得攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的小分子化合物誘導(dǎo)轉(zhuǎn)分化山羊乳腺上皮細胞GFP-CiMECs；

嘌呤霉素的濃度為1-6μg/ml；

所述小分子化合物包括VPA、Forskolin、Tranylcypromine、TTNPB、RepSox、SB431542、SB525334、SB505124、LDN-193189、LDN-214117、LDN-212854、K02288、A-83-01、SP600125、SB20358、LY2157299、LY2109761、BIBF-0775、TP0427736HCL、SD-208、Vactosertib中的一種或兩種以上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞制備轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)器的方法，其特征在于：步驟1)的外源基因為綠色熒光蛋白GFP。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的利用轉(zhuǎn)分化乳腺上皮細胞制備轉(zhuǎn)基因乳腺生物反應(yīng)器的方法在制備乳腺生物反應(yīng)器中的應(yīng)用。