[發(fā)明專(zhuān)利]一組降低尿酸酶基因表達(dá)的核苷酸序列及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011052603.8
• 申請(qǐng)日: 2020-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112226435A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 牛玉強(qiáng);王超;李忠
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 舒泰神（北京）生物制藥股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12N15/864;A01K67/027
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一組降低尿酸酶基因表達(dá)的RNA序列，與該組序列相對(duì)應(yīng)的DNA序列，修飾的核苷酸序列，雙鏈核苷酸序列，包含上述核苷酸序列的遞送載體，以及應(yīng)用上述核苷酸序列或遞送載體構(gòu)建高尿酸血癥小鼠模型的方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明公開(kāi)了一組新的抑制尿酸酶基因表達(dá)的核苷酸序列，利用本發(fā)明公開(kāi)的核苷酸序列或包含其的遞送載體構(gòu)建的高尿酸血癥小鼠的尿酸水平升高比較穩(wěn)定，發(fā)病機(jī)制與人類(lèi)相似，小鼠存活時(shí)間長(zhǎng)，并且構(gòu)建動(dòng)物模型的周期比較短且操作方便，從而為后續(xù)評(píng)價(jià)治療高尿酸及相關(guān)痛風(fēng)等疾病藥物提供了更好的動(dòng)物模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因治療領(lǐng)域，尤其涉及一組降低尿酸酶基因表達(dá)的核苷酸序列及應(yīng)用。

背景技術(shù)

高尿酸血癥是一類(lèi)因嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少，進(jìn)而導(dǎo)致血清尿酸水平過(guò)高的一類(lèi)疾病，是指正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L，即稱(chēng)為高尿酸血癥。高尿酸血癥是痛風(fēng)、腎功能損傷和多種心血管疾病的重要發(fā)病基礎(chǔ)，近年來(lái)，高尿酸血癥和痛風(fēng)的患病率越來(lái)越高，并且高尿酸血癥作為諸多代謝紊亂因素之一，常與高血壓、糖尿病、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)展密切相關(guān)，是威脅人類(lèi)健康的重要疾病。控制高尿酸血癥對(duì)這些疾病具有較好的防治作用。

目前治療高尿酸血癥的藥物根據(jù)作用機(jī)制不同可分為：抑制尿酸生成的藥物；促進(jìn)尿酸排泄的藥物；促進(jìn)尿酸分解的藥物。常見(jiàn)的有別嘌呤醇、非布索坦、丙磺舒、苯溴馬隆等。但這些藥物大多副作用明顯，對(duì)肝功能、腎功能及心肌功能造成一定損傷，患者易出現(xiàn)皮膚過(guò)敏、腹瀉、肝功能異常等不良反應(yīng)。目前尋找副作用小、安全經(jīng)濟(jì)的降尿酸藥物的需求十分迫切，但此類(lèi)藥物的篩選和開(kāi)發(fā)依賴(lài)于合適的高尿酸血癥動(dòng)物模型，因此，確立一種高效篩選藥物的高尿酸血癥動(dòng)物模型顯得至關(guān)重要。

常用的高尿酸血癥動(dòng)物模型的造模方法主要有三種，一是由動(dòng)物直接攝入尿酸、高嘌呤食物或尿酸前體物質(zhì)，如黃嘌呤或次黃嘌呤，促進(jìn)尿酸的形成，形成高尿酸血癥模型。二是通過(guò)給藥抑制尿酸排泄，增加血尿酸濃度，形成高尿酸血癥，常用的藥物為腺嘌呤、煙酸等。三是抑制尿酸酶(urate oxidase，Uox)的活性，常用的尿酸酶抑制劑為氧嗪酸等。目前大多數(shù)高尿酸血癥多以?xún)煞N或三種造模物質(zhì)同時(shí)使用，獲得穩(wěn)定持久的高尿酸血癥模型。但是以上方法誘導(dǎo)的高尿酸動(dòng)物模型中的血尿酸水平存在波動(dòng)，并且與人高尿酸發(fā)病機(jī)制存在不一致的情況。

尿酸酶可將尿酸分解為更易溶于水的小分子尿囊素排出體外，這是許多包括小鼠在內(nèi)的低級(jí)動(dòng)物維持尿酸穩(wěn)態(tài)的主要途徑，但是人類(lèi)在進(jìn)化過(guò)程中由于基因突變，導(dǎo)致該基因不能表達(dá)尿酸酶，這是人類(lèi)易患高尿酸血癥的主要原因。因此有研究采用敲除尿酸酶基因法制備高尿酸血癥小鼠模型，但是此種方法制備的動(dòng)物模型血尿酸會(huì)升高很多，達(dá)到致死水平，可以存活到成熟的小鼠很少，并且試驗(yàn)周期比較長(zhǎng)。

基于上述問(wèn)題，亟需開(kāi)發(fā)出一種有效構(gòu)建穩(wěn)定和長(zhǎng)期有效的高尿酸模型動(dòng)物的方法。

RNA干擾(RNA interference，RNAi)是由雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞中導(dǎo)入與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)同源的雙鏈RNA時(shí)，該mRNA發(fā)生降解而導(dǎo)致基因沉默。RNA干擾是一種有力的基因沉默工具，在微生物學(xué)、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。當(dāng)外源性dsRNA進(jìn)入細(xì)胞后，可被Dicer酶識(shí)別加工成21-23個(gè)核苷酸的短鏈RNA，即為小干擾RNA(siRNA)。siRNA進(jìn)入細(xì)胞后，可與細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)形成RNA誘導(dǎo)沉默核酸蛋白復(fù)合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，與序列互補(bǔ)的靶mRNA結(jié)合，對(duì)mRNA進(jìn)行酶切，阻斷相應(yīng)蛋白的翻譯。siRNA具有特異性、高效性，是特異性抑制基因表達(dá)的強(qiáng)效方法。