[發明專利]一種對盲囊線蟲的檢測鑒定方法

在審

• 申請號: 202011050626.5
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112029874A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 潘瑛子;楊欣蘭;王萬良
• 申請（專利權）人: 西藏自治區農牧科學院水產科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 成都佳劃信知識產權代理有限公司 51266
• 代理人: 鄒翠

本發明提供了一種對盲囊線蟲的檢測鑒定方法，包括如下步驟：根據對盲囊線蟲屬線蟲的形態特征，采集魚類宿主中的對盲囊線蟲；提取蟲體樣本的DNA；進行瓊脂糖凝膠電泳以檢測所提取DNA的質量，若質量合格，則建立反應體系，進行PCR擴增；將測序結果進行序列比對，若一致性在99%以上，則判定該物種為對盲囊線蟲Contracaecum eudyptulae。該鑒定方法具有實驗快捷、操作簡便、結果準確可靠的優點。

技術領域

本發明屬于傳統形態學與分子生物學檢測相結合進行鑒定的技術領域，具體涉及一種對盲囊線蟲的檢測鑒定方法。

背景技術

Contracaecum eudyptulae隸屬于蛔目(Ascaridida)異尖科(Anisakidae)對盲囊線蟲屬(Contracaecum)，是西藏土著魚類常見的一種寄生蟲。其幼蟲既可寄生于宿主腸道外壁，也可寄生于消化道內部，一般寄生數量眾多，對魚類危害較大。

因魚類只是Contracaecum eudyptulae的中間宿主，從魚體內采集到的Contracaecum eudyptulae皆為幼蟲，故從形態方面只能依靠頭部結構將該蟲鑒定到屬。在NCBI數據庫中雖然有線粒體基因數據，但在研究中發現該蟲的線粒體基因并非高度保守，而是存在較大變異，故僅使用通用引物對某一線粒體基因進行測序，結果并不能準確鑒定該蟲。物種無法確定，有針對性的保護和防治工作也無法順利開展。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種對盲囊線蟲Contracaecum eudyptulae的鑒定方法，該鑒定方法具有實驗結果準確可靠的優點。

本發明采用的技術方案是：

一種對盲囊線蟲的檢測鑒定方法，包括如下步驟：

A、根據對盲囊線蟲屬線蟲的形態特征，采集魚類宿主中的對盲囊線蟲；

B、提取蟲體樣本的DNA；

C、進行瓊脂糖凝膠電泳以檢測所提取DNA的質量，若質量合格，則建立反應體系，進行PCR擴增；

D、將測序結果進行序列比對，若一致性在99%以上，則判定該物種為對盲囊線蟲Contracaecum eudyptulae。

本發明所述線蟲Contracaecum eudyptulae的形態特征為：頭部具有唇瓣，尾部較尖，體表被環紋。

本發明所述蟲體樣本的采集方法，刮取魚類消化道的內容物和粘液，置于玻璃板中，并用同樣大小的玻璃板擠壓，使內容物和粘液分散展開，采用便攜式解剖鏡觀察蟲體形態并采集樣本。

優選地，所述玻璃板的大小為10*10cm，大小適于所使用的便攜式解剖鏡。

本發明所述特異性引物為核糖體基因18S擴增引物，核苷酸序列為：

上游引物： CGAGACCGTACTCTTTGAG

下游引物： TCACGGTGTCCGGGCCAGGTG。

本發明所述D步驟用于序列比對的堿基序列為SEQID：NO.3。