[發明專利]凈化黑臭水體復合生物菌劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202011049634.8
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112175866A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 周歡
• 申請（專利權）人: 南京樂萱生態環境科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C02F3/34;C12R1/125;C12R1/84;C12R1/085;C12R1/01
• 代理公司: 南京泰普專利代理事務所(普通合伙) 32360
• 代理人: 竇賢宇

1.一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，以重量份數，包括如下成分，其特征在于：枯草芽孢桿菌50~60份、產甲烷菌30~35份、除臭植物液75~100份、硫細菌50~75份、硝化菌50~75份、巴斯德畢赤酵母45~50份、芽孢桿菌株100~120份、培養液1000~2000份、em菌液500~600份。

2.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的產甲烷菌采用在液面加石蠟的液體中進行深層培養法，且產甲烷菌采用厭氧手套箱進行制備工藝，且產甲烷菌采用革蘭氏陽性菌作為成分。

3.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的除臭植物液采用植物葉片果實、樹皮、樹根、芽、種子中提取的植物液體，且所述除臭植物液包括萜烯類，醛、醇和酮的直鏈化合物，乙酸芐酯，香草醛，肉桂酸和甲酸香葉酯。

4.根據權利要求3所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的萜烯類采用蒎烷和薄荷烷，所述的醛、醇和酮的直鏈化合物采用葵醇和葉桂醇中提取的可揮發的植物油。

5.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的硫細菌采用不產色素的好氧化能營養菌，所述的巴斯德畢赤酵母采用較溫和的純化方式來純化目的蛋白，采用硫酸銨沉淀，再通過離子交換，凝膠過濾層析，疏水層析的方法進一步純化蛋白。

6.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的芽孢桿菌株采用蠟狀芽孢桿菌，在溫度為28-37℃下從多種食品中分離出蠟狀芽孢桿菌，包括肉、乳制品、蔬菜、魚、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯以及各種甜點，進行提取培育。

7.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的培養液采用完全無機鹽培養液，包括如下成分，硝酸鈣1g，磷酸二氫鉀0.25g，硫酸鎂0.25g，氯化鐵0.25g，氯化鉀g，1L蒸餾水。

8.根據權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的em菌液的成分采用光合細菌、乳酸菌、放線菌和酵母菌。

9.根據權利要求8所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑，其特征在于：所述的光合細菌采用含有葉綠素a、以水作為供氫體和電子供體、通過光合作用將光能轉變成化學能、同化CO2為有機物質的光合細菌，所述的乳酸菌采用植物源乳酸菌，所述的放線菌采用形態為孢子類細菌，所述的酵母菌采用植物類分泌酵母。

10.權利要求1所述的一種凈化黑臭水體復合生物菌劑的制備方法，具體包括如下步驟：

步驟一：取親本菌株T4412、TT2新鮮斜面分別接一環到裝有液體完全培養基的試管中，36℃振蕩培養14h；

步驟二：T4412、TT2各取1ml菌液轉接入裝有20ml液體完全培養基的250ml錐形瓶中，36℃振蕩培養3h，使細胞生長進入對數前期；

步驟三：T4412、TT2各加入25u/ml青霉素，使其終濃度為0.3u/ml，繼續振蕩培養2h；

步驟四：T4412、TT2各取菌液10ml，4000r/min離心10min，棄上清液，將菌體懸浮于磷酸緩沖液中，離心，重復洗滌兩次，將菌體懸浮10ml的SMM中，每ml的SMM中含108～109活菌；

步驟五：T4412、TT2各取菌液0.5ml，用生理鹽水稀釋，取10-5、10-6、10-7各1ml，傾注完全培養基，36℃培養24h后計數；

步驟六：二株親本菌株各取5ml菌懸液，加入5ml溶菌酶溶液，溶菌酶濃度為100ug/ml，混勻后于36℃水浴保溫處理30min，定時取樣，鏡檢觀察原生質體形成情況，當95%以上細胞變成球狀原生質體時，用4000r/min離心10min，棄上清液，用高滲緩沖液洗滌除酶，然后將原生質體懸浮于5ml高滲緩沖液中，制得枯草芽孢桿菌；

步驟七：將并涂布平板1/5~1/3區域，使用接種環交叉劃線涂布區域使形成單菌落。