[發明專利]一種核酸適配體及其在檢測雌二醇中的應用

在審

• 申請號: 202011048180.2
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112175957A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 陳愛亮;喬璐;何軍林;王荷;于文杰;謝瑞彬;楊曙明
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/74;G01N21/31
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙靜

1.一種核酸適配體，為如下A1)-A9)中任一種：

A1)序列1所示的單鏈DNA分子；

A2)序列2所示的單鏈DNA分子；

A3)序列3所示的單鏈DNA分子；

A4)將A1)所示的核酸適配體刪除或增加一個或幾個核苷酸，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物；

A5)將A1)或A4)所示的核酸適配體進行核苷酸取代或修飾，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適體的衍生物；

A6)將A2)所示的核酸適配體刪除或增加一個或幾個核苷酸，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物；

A7)將A2)或A6)所示的核酸適配體進行核苷酸取代或修飾，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適體的衍生物；

A8)將A3)所示的核酸適配體刪除或增加一個或幾個核苷酸，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物；

A9)將A3)或A8)所示的核酸適配體進行核苷酸取代或修飾，得到與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適體的衍生物。

2.根據權利要求1所述的核酸適配體，其特征在于：所述A5)、A7)和A9)中，所述修飾為磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化或同位素化。

3.權利要求1或2所述的核酸適配體在下述B1)-B4)至少一種中的應用：

B1)在結合雌二醇中的應用；

B2)在定性和/或定量檢測雌二醇中的應用；

B3)在制備用于檢測雌二醇的試劑盒中的應用；

B4)在制備用于檢測雌二醇的生物傳感器中的應用。

4.一種產品，其包括權利要求1或2所述的核酸適配體。

5.根據權利要求4所述的產品，其特征在于：

所述產品具有如下C1)-C3)中至少一種用途：

C1)結合雌二醇；

C2)檢測待測樣品中是否含有雌二醇；

C3)測定待測樣品中雌二醇的含量。

6.根據權利要求5所述的產品，其特征在于：

所述產品為試劑盒或生物傳感器；

所述生物傳感器為基于納米金比色發或熒光法或電化學法制備的檢測雌二醇的生物傳感器；

所述產品中，所述待測樣品為液態樣品或固態樣品。

7.一種基于納米金比色法檢測待測樣品中是否含有雌二醇的方法，包括下述步驟：

1)將權利要求1或2所述核酸適配體與待測樣品混勻后，進行反應；

2)向步驟1)反應體系中加入納米金溶液孵育；

3)向步驟2)體系中加入鹽溶液，得到最終體系，5min后觀察顏色變化；

將步驟1)中所述待測樣品替換為等量的水，重復上述步驟1)-3)的操作，得到對照體系；

若體系的顏色由紅色變成藍色或灰色，則待測樣品中含有雌二醇或候選含有雌二醇；

若最終體系的顏色與對照體系的顏色相比無變化，則待測樣品中不含有雌二醇或候選不含有雌二醇。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：

所述步驟1)中，所述反應的條件為：15-25℃反應10min-20min；

所述步驟2)中，所述納米金的粒徑為13nm；所述孵育的時間為10min；

所述步驟3)中，所述最終體系的組成如下：25μL核酸適配體溶液、25μL待測樣品、50μL納米金溶液、10μL NaCl溶液；

所述核酸適配體溶液的濃度為3μM-4μM；

所述核酸適配體為序列1所示的單鏈DNA分子，其最優濃度為3μM；

所述核酸適配體為序列2或3所示的單鏈DNA分子，其最優濃度為4μM。

所述納米金溶液是由100mL 1mM四氯金酸溶液經2mL 194mM的檸檬酸三鈉溶液氧化還原所得；

所述NaCl溶液的濃度為0.6M。