[發(fā)明專利]生物樣品中菌體的分離、質(zhì)譜鑒定及藥物敏感性檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011047451.2
• 申請(qǐng)日: 2020-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112345619B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪維禮;藍(lán)璐;王璞;孫波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京航空航天大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62;G01N1/28;C12M1/36;C12M1/10;C12M1/00;C12Q1/24
• 代理公司: 北京華進(jìn)京聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11606
• 代理人: 彭輝

1.一種生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，采用微流控系統(tǒng)，所述微流控系統(tǒng)包括：

微流控芯片，所述微流控芯片設(shè)置有多個(gè)工作區(qū)，每個(gè)所述工作區(qū)開(kāi)設(shè)有：加樣室、反應(yīng)室、樣品收集室、虹吸閥以及廢液室；所述加樣室、所述反應(yīng)室、所述樣品收集室和所述廢液室沿徑向依次間隔設(shè)置，所述反應(yīng)室分別與所述加樣室和所述樣品收集室連通，所述反應(yīng)室通過(guò)所述虹吸閥與所述廢液室連通，使得所述微流控芯片在進(jìn)行離心操作時(shí)，所述加樣室內(nèi)的液態(tài)樣品可沿徑向依次流入所述反應(yīng)室和所述樣品收集室，所述反應(yīng)室內(nèi)的廢液可以通過(guò)所述虹吸閥吸入至所述廢液室；

加樣裝置，用于將液態(tài)樣品加入所述加樣室內(nèi)，所述液態(tài)樣品包括生物樣品或重懸液；

旋轉(zhuǎn)伸縮裝置，與所述加樣裝置固定連接；

控制裝置，分別與所述加樣裝置和所述旋轉(zhuǎn)伸縮裝置電連接，用于通過(guò)所述旋轉(zhuǎn)伸縮裝置控制所述加樣裝置沿所述旋轉(zhuǎn)伸縮裝置的軸向做旋轉(zhuǎn)和伸縮運(yùn)動(dòng)，以使所述加樣裝置將所述液態(tài)樣品加入所述微流控芯片內(nèi)，還用于控制所述加樣裝置加入所述微流控芯片內(nèi)的加樣量；

所述分離方法包括以下步驟：

a、通過(guò)所述加樣裝置將生物樣品加入所述微流控芯片中的加樣室，將所述微流控芯片靜置第一預(yù)設(shè)時(shí)間后，控制轉(zhuǎn)動(dòng)裝置按照第一轉(zhuǎn)速帶動(dòng)所述微流控芯片進(jìn)行離心旋轉(zhuǎn)，所述第一轉(zhuǎn)速的設(shè)定使得所述加樣室中的液體進(jìn)入廢液室，沉淀留在樣品收集室或者反應(yīng)室，所述生物樣品中含有細(xì)菌和真菌中的至少一種；

b、將所述微流控芯片離心旋轉(zhuǎn)后控制所述轉(zhuǎn)動(dòng)裝置停止，通過(guò)所述加樣裝置將重懸液加入所述加樣室，并控制所述轉(zhuǎn)動(dòng)裝置按照第二轉(zhuǎn)速帶動(dòng)所述微流控芯片進(jìn)行正反交替離心旋轉(zhuǎn)，使得加樣室內(nèi)的所述重懸液流入反應(yīng)室中，所述第二轉(zhuǎn)速的設(shè)定使得所述反應(yīng)室和所述樣品收集室中的樣品混合，所述混合包括沉淀和液體的混合，將所述微流控芯片進(jìn)行正反交替離心旋轉(zhuǎn)后，控制所述轉(zhuǎn)動(dòng)裝置按照所述第一轉(zhuǎn)速帶動(dòng)所述微流控芯片進(jìn)行離心旋轉(zhuǎn)，所述第二轉(zhuǎn)速小于所述第一轉(zhuǎn)速。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，所述生物樣品選自唾液、血液、血清、血漿、組織裂解液、羊水、絨毛、陰道分泌物、糞便、腦脊液或尿液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，所述第一轉(zhuǎn)速為270 ×g~1470 ×g，所述第二轉(zhuǎn)速為27 ×g ~147 ×g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，步驟b中以第二轉(zhuǎn)速進(jìn)行正反交替離心中首次離心的方向與步驟a中的離心方向相同，步驟b以第一轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心的方向與步驟a中的離心方向相同。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，第一轉(zhuǎn)速為270 ×g ~1470 ×g，第二轉(zhuǎn)速為27 ×g ~147 ×g，步驟a中，第一預(yù)設(shè)時(shí)間為20s~40s，第一轉(zhuǎn)速的離心時(shí)間為250s~350s；步驟b中，第二轉(zhuǎn)速正向和反向離心單次時(shí)間分別為5s~10s，正反交替離心總次數(shù)為8~10次，第一轉(zhuǎn)速的離心時(shí)間為250s~350s。

6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，所述加樣裝置包括：

加樣控制臺(tái)，與所述控制裝置電連接；

注射主體，設(shè)置于所述加樣控制臺(tái)；以及

注射頭，與所述注射主體連通，所述控制裝置通過(guò)所述加樣控制臺(tái)控制所述注射主體將所述液體沿所述注射頭加入所述微流控芯片內(nèi)的加樣量。

7.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，所述旋轉(zhuǎn)伸縮裝置包括：

旋轉(zhuǎn)臺(tái)，與所述控制裝置電連接；以及

伸縮臂，所述伸縮臂的一端固定于所述旋轉(zhuǎn)臺(tái)，所述伸縮臂遠(yuǎn)離所述旋轉(zhuǎn)臺(tái)的一端與所述加樣裝置固定連接。

8.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述的生物樣品中菌體的分離方法，其特征在于，所述反應(yīng)室沿所述微流控芯片的徑向截面形狀為漏斗形。