[發(fā)明專利]一種可溶性表達(dá)系統(tǒng)及其在蛋白可溶性表達(dá)中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011047143.X
• 申請(qǐng)日: 2020-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114317577A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文良柱;方宏清;韋炎龍;竇俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇萬(wàn)邦醫(yī)藥科技有限公司;萬(wàn)新醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司;江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/61;C12N15/53;C12N9/48;C12N9/76;C12R1/19
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 杜靜;張磊

1.一種原核生物可溶性表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于，所述可溶性表達(dá)系統(tǒng)具有巰基氧化酶基因和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶基因；所述蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶基因前具有突變型trx標(biāo)簽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可溶性表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于，巰基氧化酶基因?yàn)镋RV1，序列如SEQ ID NO.1所示；蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶基因選自序列如SEQ ID NO.2所示的hPDI、序列如SEQ ID NO.3所示的sPDI或序列如SEQ ID NO.4所示的DsbC。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可溶性表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于，巰基氧化酶基因前也具有突變型trx標(biāo)簽。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可溶性表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于，突變型trx標(biāo)簽序列如SEQ IDNO.8所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可溶性表達(dá)系統(tǒng)，其特征在于，還包括啟動(dòng)子序列；優(yōu)選的，啟動(dòng)子為阿拉伯糖啟動(dòng)子或T7啟動(dòng)子。

6.包含權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)的載體。

7.包含權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)或權(quán)利要求6所述的載體的試劑盒。

8.一種原核生物可溶性表達(dá)目標(biāo)蛋白的方法，其特征在于，用帶有權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的表達(dá)系統(tǒng)的載體轉(zhuǎn)化原核宿主細(xì)胞，所述原核宿主細(xì)胞中還同時(shí)具有目標(biāo)蛋白表達(dá)載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述目標(biāo)蛋白要求形成至少兩個(gè)鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵以獲得生物學(xué)活性；優(yōu)選的，所述目標(biāo)蛋白為羧肽酶B或胰蛋白酶原。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述原核宿主細(xì)胞為大腸桿菌，優(yōu)選為E.coli BL21(DE3)。