[發明專利]幽門螺旋桿菌檢測用核酸適配體與篩選檢測方法及用途

有效

• 申請號: 202011045296.0
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112094847B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 呂明生;武航婕;王淑軍;秦銘燦;馬小藝;范詩慧;田雪晴;盧靜
• 申請（專利權）人: 江蘇海洋大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/569;G01N33/58
• 代理公司: 北京深川專利代理事務所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

本發明公開了一種用于幽門螺旋桿菌特異性檢測的單鏈DNA核酸適配體，所述核酸適配體的核苷酸序列如HPA?2中所示。本發明還公開了該幽門螺旋桿菌特異性檢測的篩選方法及檢測方法與用途。檢測方法以核酸適配體修飾的淬滅基團作為識別探針，以核酸適配體互補鏈修飾的熒光作為熒光探針，幽門螺旋桿菌的檢測是通過核酸適配體探針的熒光變化來實現的。本發明核酸適配體含有80個堿基和特殊的二級結構，其對幽門螺旋桿菌菌體表面蛋白的親和力達到19.3±3.2nM。該核酸適配體針對幽門螺旋桿菌具有高特異性的特點，可用于對幽門螺旋桿菌的快速檢測。

技術領域

本發明屬病原微生物檢測技術領域，具體涉及一種可用于特異性檢測幽門螺旋桿菌的核酸適配體，本發明還涉及用核酸適配體檢測幽門螺旋桿菌的方法與用途。

背景技術

大量研究表明，超過90%的十二指腸潰瘍和80%的胃潰瘍是由幽門螺旋桿菌感染引起的，可引起胃粘膜輕度慢性炎癥，甚至胃、十二指腸潰瘍、胃癌。自1983年胃鏡活檢標本成功分離培養以來，細菌學、基因組學、同位素示蹤、病理學、血清學、分子生物學等多種診斷幽門螺桿菌感染的方法不斷發展。但一般從標本采集的角度來看，可分為兩類：侵入性和非侵入性。侵入性方法主要是指通過胃鏡進行活檢標本檢查的方法，是目前消化疾病學科的一種常規方法，包括細菌的分離培養、直接涂片、快速脲酶試驗、藥敏試驗等；非侵入性方法主要是指不用胃鏡取活檢標本診斷幽門螺旋桿菌感染的方法，包括抗體檢測、抗原檢測、尿素13C/14C呼氣試驗等。雖然這些方法對幽門螺桿菌的檢測是有效的，但大多數都需要復雜的儀器和專業的操作人員，極大地限制了早期檢測和預防健康造成的致命后果和經濟損失。因此，開發一種簡單、快速、高度特異性和實用的檢測幽門螺桿菌的方法至關重要。

核酸適配體是通過體外篩選技術篩選的單鏈功能化核酸，SELEX是適配體的指數富集系統進化。其典型的三維結構和靶標特異性使其成為一種潛在的新型分子受體。與抗體相比，適配體具有分子量小、不具有免疫原性、穩定性好、易于合成、靶點廣泛、特異性高、親和力強等優點。基于這些優異的特性，適配體已成為免疫診斷、藥理學、生物傳感器、納米材料等諸多領域的研究熱點。特別是新型核酸藥物的出現，使人們逐漸擺脫了傳統藥物的毒副作用，為人類診斷和治療癌癥等疾病提供了新的研究平臺。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種新的用于幽門螺旋桿菌快速檢測的ssDNA核酸適配體。

本發明的又一目的是提供用所述核酸適配體進行檢測幽門螺旋桿菌的方法，用于幽門螺旋桿菌快速檢測。

本發明的再一目的是提供上述單鏈DNA核酸適配體的篩選方法與用途。

為實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

本發明公開了一種用于幽門螺旋桿菌特異性檢測的單鏈DNA核酸適配體，所述核酸適配體的核苷酸序列如HPA-2中所示：

HPA-2：5’-AAGGAGCAGCGTGGAGGTTACCAGGAGGACCCTATTCTCG

TGTATCGACGAGATCCAGTGACCACGACGACACACCCTAA-3’。

本發明所述的所述的用于幽門螺旋桿菌特異性檢測的單鏈DNA核酸適配體，進一步優選的技術方案是：對核酸適配體進行突變或改造，使其能用于幽門螺旋桿菌的檢測。

本發明所述的所述的用于幽門螺旋桿菌特異性檢測的單鏈DNA核酸適配體，進一步優選的技術方案是：所述的突變或改造方法選自：改造、磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化、同位素化修飾；或者添加生物素、地高辛、熒光物質、淬滅基團、納米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、葉酸或酶標記以用于幽門螺旋桿菌的檢測。

本發明所述的所述的用于幽門螺旋桿菌特異性檢測的單鏈DNA核酸適配體，進一步優選的技術方案：熒光標記的核酸適配體互補鏈長度在10%-25%之間。