[發(fā)明專利]特異結(jié)合NCL-H460細胞的七肽、編碼基因、制備方法及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011044984.5
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112266408B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 薛頔;林雪;王玉炯
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/10;G01N33/574;A61K47/42
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 冒艷

本發(fā)明公開了特異結(jié)合NCL?H460細胞的七肽、編碼基因、制備方法及用途。七肽的氨基酸序列為Ala?Gly?Thr?Lys?Phe?Thr?Ser，其編碼基因的核苷酸序列為taattatcacgacaactacct。通過噬菌體展示技術(shù)篩選出能特異性結(jié)合NCL?H460細胞表面抗原的多肽Ala?Gly?Thr?Lys?Phe?Thr?Ser，該多肽能抑制NCL?H460細胞的生長，進而對細胞增殖的抑制來抑制肺癌的發(fā)展。該多肽特異性強、親和性高、活性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及特異結(jié)合NCL-H460細胞的七肽、編碼基因、制備方法及用途。

背景技術(shù)

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，肺癌在早期階段，是很難被檢測到的，而且這種癌癥也很難治療。因此，它是世界癌癥死亡的主要原因。肺癌最常見的病因是吸煙。由于對早期NSCLC診斷難度較大，為此大部分NSCLC患者確診時已為晚期，喪失手術(shù)切除機會，傳統(tǒng)化療則進入平臺期，尤其是分子技術(shù)發(fā)展，靶向治療逐漸開展起來，使得NSCLC治療有了個體化的方案。

近幾年，生物免疫治療逐漸開展起來，成為晚期NSCLC治療的新方法。NSCLC生物免疫治療主要有三類方案：(1)被動免疫治療：主要經(jīng)體外免疫活性物質(zhì)且不依賴宿主自身免疫而發(fā)揮作用，比如細胞因子、過繼細胞免疫治療等。(2)主動免疫治療：通過特異性啟動機體免疫系統(tǒng)來對腫瘤進行識別，從而提高抗腫瘤淋巴細胞，將免疫抑制環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖叽碳きh(huán)境，這種治療方案主要是經(jīng)免疫疫苗實現(xiàn)，比如EGF疫苗、Mucin疫苗、樹突細胞疫苗等，特異性啟動免疫系統(tǒng)來識別腫瘤后提高淋巴細胞，但關(guān)于腫瘤疫苗3期還在研究中，并無明確開展相關(guān)研究，也未能有效證實其療效劑。(3)腫瘤及其周圍細胞免疫抑制狀態(tài)是其微環(huán)境主要特點，T細胞數(shù)目、活性受損則是造成免疫抑制最為直接的一個原因，同時T細胞活性細胞關(guān)閉存在免疫相關(guān)檢查點，比T細胞免疫球蛋白黏蛋白、細胞毒性T淋巴細胞免疫相關(guān)抗原等，屬于T細胞聚集、效用功能調(diào)節(jié)的共阻礙因子，若與配體結(jié)合會造成T細胞效應(yīng)下降，持續(xù)信號會造成其枯竭，喪失分化、分泌細胞因子等功能，改變T細胞免疫抑制作用

目前的靶向藥物遞送系統(tǒng)中的給藥載體包括單克隆抗體、多肽、脂質(zhì)體和納米粒等，其中的多肽因具有高親和性、較好的特異性和安全性的特點而受到廣泛關(guān)注，目前已成為一種發(fā)展迅速且應(yīng)用日益廣泛的新型靶向給藥載體。靶向的多肽偶聯(lián)藥物遞送系統(tǒng)，首先要發(fā)現(xiàn)具有靶向結(jié)合活性的多肽載體，可以通過噬菌體展示肽庫篩選、化學(xué)合成活性肽的方法獲取靶向多肽載體。因為NCL-H460細胞是非小細胞癌中主要的細胞，它的發(fā)生發(fā)展決定著癌癥的發(fā)生發(fā)展，因此我們希望能通過噬菌體展示技術(shù)篩選出能特異性結(jié)合NCL-H460細胞表面抗原的多肽，以抑制NCL-H460細胞的生長，希望能通過對細胞增殖的抑制來抑制癌癥的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明目的是提供特異性強、親和性高、活性好的特異結(jié)合NCL-H460細胞的七肽及編碼基因。

本發(fā)明另一目的是提供所述七肽及編碼基因的制備方法。

本發(fā)明最后一目的是提供所述七肽及編碼基因的用途。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供一種特異結(jié)合NCL-H460細胞的七肽，氨基酸序列為Ala?GlyThr?Lys?Phe?Thr?Ser，其編碼基因的核苷酸序列為taattatcacgacaactacct。

進一步地，所述七肽以融合蛋白的形式融合表達在噬菌體外殼蛋白PVIII或PIII的N端。

所述的特異結(jié)合NCL-H460細胞的七肽的制備方法，包括如下步驟：

(1)將NCL-H460細胞包被在平板上，封閉平板，將噬菌體展示隨機七肽庫加入包被和封閉后的平板中，進行至少4輪生物學(xué)淘選并測定每輪淘選后的噬菌體滴度；