[發(fā)明專(zhuān)利]生產(chǎn)戊基二羥基苯酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011044859.4
• 申請(qǐng)日: 2020-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112280699B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳賢情;李珍珠;王筱;楊月;夏文豪;江會(huì)鋒;王文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 嘉興欣貝萊生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/19
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/19;C12N9/10;C12N9/88;C12N15/54;C12N15/60;C12P7/42;C12R1/865
• 代理公司: 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本發(fā)明涉及一種重組釀酒酵母，其由將AAE、OLS和OAC蛋白的編碼基因?qū)脶劸平湍付苽洹Ｍ瑫r(shí)，本發(fā)明還提供了生產(chǎn)戊基二羥基苯酸的方法，其包括將上述重組釀酒酵母進(jìn)行發(fā)酵。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于合成生物學(xué)領(lǐng)域，涉及生產(chǎn)戊基二羥基苯酸的方法，具體地是涉及重組釀酒酵母生產(chǎn)戊基二羥基苯酸的方法。

背景技術(shù)

幾千年來(lái)大麻由于其藥用特性而在全球范圍內(nèi)種植和使用。一些大麻素——大麻的標(biāo)志性成分，及其類(lèi)似物針對(duì)其潛在的醫(yī)學(xué)應(yīng)用已被廣泛研究。在一些國(guó)家，某些 大麻素制劑已被批準(zhǔn)作為處方藥用于治療各種人類(lèi)疾病。然而，大麻素的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性 限制了大麻素的批量化學(xué)合成。戊基二羥基苯酸(olivetolic acid，OA)是大麻素生物 合成途徑的初始中間體，當(dāng)前提高大麻素的方法也包括提高OA的產(chǎn)量，但是現(xiàn)有技 術(shù)中一般用化學(xué)合成法合成OA，化學(xué)合成OA成本較高，有機(jī)試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿使用量 大，對(duì)研究人員造成較大危害，且容易造成環(huán)境污染，不利于環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展；同 時(shí)大麻的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性也限制了OA的批量化學(xué)合成。所以，如何產(chǎn)生高產(chǎn)量的大麻素 依舊是本領(lǐng)域當(dāng)前的一大難題。

發(fā)明內(nèi)容

據(jù)報(bào)道，有兩種大麻酶，四酮化合物合酶(OLS(Cannabis sativa TKS，CsTKS)) 和戊基二羥基苯酸環(huán)化酶(OAC(Cannabis sativa OAC，CsOAC))，可以催化己酰基 -CoA和丙二酰-CoA產(chǎn)生戊基二羥基苯酸。

所以，經(jīng)過(guò)多年的研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過(guò)將AAE、OLS和OAC蛋白的編碼基因 針對(duì)宿主(例如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))進(jìn)行密碼子優(yōu)化后，導(dǎo)入宿主 可以實(shí)現(xiàn)OA(戊基二羥基苯酸，olivetolic acid)的生物合成。

具體地，本發(fā)明提供以下方面：

[1].重組釀酒酵母，其由將AAE、OLS和OAC蛋白的編碼基因?qū)脶劸平湍?Saccharomyces cerevisiae)而制備。其中所述AAE全稱(chēng)為endogenous acyl activatingenzyme，是內(nèi)源性酰基活化酶，OLS為四酮化合物合酶，OAC為戊基二羥基苯酸環(huán)化 酶，其中

所述AAE蛋白的編碼基因優(yōu)選來(lái)源于煙草(Nicotiana tabacum)、荷花(Nelumbonucifera)、胡蘿卜(Daucus carota subsp.sativus)、大麻(Cannabis sativa)、蓖麻(AAE-Ricinus communis)、苜蓿(Medicago truncatula)或蘋(píng)果(Malus domestica)，或是人工合成的， 優(yōu)選地，其來(lái)源于煙草；

所述OLS蛋白的編碼基因來(lái)源于大麻(Cannabis sativa)、玫瑰木屬(Rhodamniaargentea)、蜜柑(Citrus unshiu)、黃瓜(Cucumis sativus)、蛇麻籽(Humulus lupulus)或落 花生(Arachis hypogaea)，或是人工合成的，優(yōu)選地，其來(lái)源于玫瑰木屬；

所述OAC蛋白的編碼基因來(lái)源于大麻(Cannabis sativa)、三葉草(Trifoliumpratense)、 羽扇豆(Lupinus albus)、大豆(Glycine max)或木槿(Hibiscus syriacus)，或是人工合成的， 優(yōu)選地，其來(lái)源于大麻。

[2].項(xiàng)[1]所述的重組釀酒酵母，其中

來(lái)源于煙草的所述AAE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，優(yōu)選地其編碼 基因如SEQ ID NO：2所示；

來(lái)源于荷花的所述AAE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，優(yōu)選地其編碼 基因如SEQ ID NO：4所示；

來(lái)源于胡蘿卜的所述AAE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，優(yōu)選地其編 碼基因如SEQ ID NO：6所示；