[發(fā)明專利]肝癌類器官及其培養(yǎng)方法、培養(yǎng)用培養(yǎng)基和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011042946.6
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112210537B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李程;黃思穎;孫志堅;康平
• 申請（專利權(quán)）人: 北京科途醫(yī)學(xué)科技有限公司;浙江科途醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超

1.一種培養(yǎng)肝癌類器官的方法，其特征在于，該方法包括：

將肝癌組織細胞與培養(yǎng)基和基質(zhì)膠混合，得到待培養(yǎng)物，其中，所述培養(yǎng)基中含有胰島素生長因子-2，以所述培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述胰島素生長因子-2的濃度為5～10ng/ml；

所述肝癌組織細胞由肝癌組織經(jīng)酶解處理得到；

對所述待培養(yǎng)物進行培養(yǎng)擴增，得到肝癌類器官；

所述培養(yǎng)基中還含有高級 DMEM/F 12培養(yǎng)基、谷氨酰胺、青鏈霉素、HEPES、B27 補充劑、N2 補充劑、N-乙酰半胱氨酸、重組人-胃泌素I、重組人FGF10、毛喉素和A83-01；

以所述培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述谷氨酰胺的含量為0.1～10體積%，所述青鏈霉素的濃度為50～200μg/ml，所述HEPES的濃度為5～25mM，所述B27補充劑的含量為1～10體積%，所述N2補充劑的含量為0.1～5體積%，所述N-乙酰半胱氨酸的濃度為0.1～5mM，所述重組人-胃泌素I的濃度為1～50nM，所述重組人FGF10的濃度為50～200ng/ml，所述毛喉素的濃度為1～20μM，所述A83-01的濃度為1～10μM，余量為所述高級DMEM/F 12培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待培養(yǎng)物中，所述肝癌組織細胞的濃度為1×10⁴～5×10⁴個/mL，所述基質(zhì)膠的含量為2～15體積%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述酶解處理包括：

將所述肝癌組織與酶解液混合，得到待酶解物；

將所述待酶解物進行培養(yǎng)酶解2～12h，得到酶解產(chǎn)物；

對所述酶解產(chǎn)物進行分離處理，得到所述肝癌組織細胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶解液中含有DMEM/F 12培養(yǎng)基、HEPES、青鏈霉素、谷氨酰胺和膠原酶，以所述酶解液為基準(zhǔn)，所述HEPES的濃度為5～25mM，所述青鏈霉素的濃度為50～200μg/ml，所述谷氨酰胺的含量為0.1～10體積%，所述膠原酶的含量為1～5ng/ml。

5.一種用于肝癌類器官培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基中含有胰島素生長因子-2，以所述培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述胰島素生長因子-2的濃度為5～10ng/ml；

所述培養(yǎng)基中還含有高級 DMEM/F 12培養(yǎng)基、谷氨酰胺、青鏈霉素、HEPES、B27 補充劑、N2 補充劑、N-乙酰半胱氨酸、重組人-胃泌素I、重組人 FGF10、毛喉素和A83-01；其中，

以所述培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述谷氨酰胺的含量為0.1～10體積%，所述青鏈霉素的濃度為50～200μg/ml，所述HEPES的濃度為5～25mM，所述B27補充劑的含量為1～10體積%，所述N2補充劑的含量為0.1～5體積%，所述N-乙酰半胱氨酸的濃度為0.1～5mM，所述重組人-胃泌素I的濃度為1～50nM，所述重組人FGF10的濃度為50～200ng/ml，所述毛喉素的濃度為1～20μM，所述A83-01的濃度為1～10μM，余量為所述高級DMEM/F 12培養(yǎng)基。