[發明專利]一種評估冠心病預后的分子標志物miR-223及其應用

在審

• 申請號: 202011040334.3
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112111571A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 吳鴻;韓勇軍;高水波;雷震;王新洲;高海霞;常紅波;劉珊珊;秦楠
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/113
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 蔡文雅

1.一種評估冠心病預后的分子標志物miR-223，其特征在于，所述的miR-223的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.權利要求1所述的分子標志物miR-223在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用。

3.根據權利要求2所述的分子標志物miR-223在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述的評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒包括置于盒體內的用于評估冠心病預后的試劑盒所用的逆轉錄引物，序列為SEQ ID No：2所示，特異性擴增引物，序列為SEQ ID No：3、SEQ ID No：4所示，內參基因U6表達的特異性擴增引物序列，引物序列為SEQ ID No：5、SEQ ID No：6所示，從血漿中提取miRNA，并進行逆轉錄及熒光定量PCR的試劑。

4.根據權利要求3所述的分子標志物miR-223在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述的從血漿中提取miRNA，并進行逆轉錄及熒光定量PCR的試劑包括：

(1)從冠心病或健康者中抽提總RNA所用試劑，包括Trizol液、氯仿、異丙醇、抑制RNA降解溶劑、75％乙醇，DEPC水；

(2)以總RNA為模板分別使用miRNA-223逆轉錄引物和U6下游引物逆轉錄為cDNA所用試劑，包括逆轉錄反應緩沖液、含有含Mg2+的三磷酸堿基脫氧核苷酸dNTP、逆轉錄酶M-MLV；

(3)將cDNA實時定量PCR所用試劑，包括miRNA-223實時熒光定量PCR特異性引物、U6內參特異性PCR引物、實時熒光定量SYBR染料、無RNA酶的水。

5.一種檢測人類血液中冠心病預后的分子標志物miR-223的檢測方法，所述的檢測方法不以有生命的人體或動物體為直接實施對象，其特征在于，包括以下步驟：

1)收集待測冠心病患者或健康者血漿，放入盛有抑制RNA降解溶劑的凍存管中，放至-80℃冰箱，備用；

2)血漿RNA的抽提；

3)miRNA-223 RNA的逆轉錄；

4）利用miRNA-223的特異性引物進行實時定量PCR；

5）采用相對定量方法對實時定量PCR的結果進行分析。

6.根據權利要求2或3或4任一項所述的分子標志物miR-223在制備評估冠心病預后實時熒光定量PCR檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述PCR擴增的條件為:

a. 預變性：95℃ 2分鐘

b. 變性：95℃ 15秒

c. 退火/延伸：60℃ 30秒

d. 重復步驟b和步驟c，總共40個循環。