[發明專利]一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法

在審

• 申請號: 202011039603.4
• 申請日: 2020-09-28
• 公開（公告）號: CN112094883A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 鄧家國;魏紅霞;李國軍
• 申請（專利權）人: 常德云港生物科技有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P33/00;C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 常德市長城專利事務所(普通合伙) 43204
• 代理人: 游先春

1.一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，具體的制備過程如下：

（1）孢子和種子的制備

用接種環挑取球形芽孢桿菌AKU218的菌絲體在PDA平板上劃線，于恒溫培養箱中培養，得到球形芽孢桿菌AKU218平板；

（2）α-豬去氧膽酸的微生物轉化

從步驟（1）的球形芽孢桿菌AKU218平板上，挑取一環步驟（1）中制備的球形芽孢桿菌AKU218的菌絲體，接種在滅菌后的細菌培養基中，恒溫震蕩培養48-72小時，離心分離回收菌體；然后將回收菌體接種到含有α-豬去氧膽酸及β-氧化抑制劑 2,2’-Bipyridyl的無機鹽培養基中發酵；

（3）轉化產物的分離提純

在步驟（2）中培養后的無機鹽培養基中，添加等體積的乙酸乙酯進行抽提分離，分離后的產物經脫色純化后為白色粉末狀的β-豬去氧膽酸，且α-豬去氧膽酸轉化為β-豬去氧膽酸的轉化率為80%-90%。

2.根據權利要求1所述的一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，步驟（1）中恒溫培養箱中溫度為28℃，培養時間為3-5天。

3.根據權利要求1所述的一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，步驟（2）中α-豬去氧膽酸的微生物轉化的具體步驟如下：

A.從步驟（1）的球形芽孢桿菌AKU218平板上，挑取一環步驟（1）中制備的球形芽孢桿菌AKU218的菌絲體，接種在滅菌后的細菌培養基中，于 28℃，120 rpm 條件下恒溫震蕩培養48-72小時，于3000 rpm條件下離心10分鐘后，分離回收菌體；

B. 將步驟A所得的菌體分散于無機鹽培養基中，所述無機鹽培養基中加入已事先溶解的α-豬去氧膽酸及β-氧化抑制劑 2,2’-Bipyridyl，然后將上述無機鹽培養基放入置有脫氧劑的密閉容器中，于28℃，120 rpm的厭氧條件下培養36-72小時。

4.根據權利要求3所述的一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，步驟A中所述細菌培養基包括以下組分：胰蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，糖類1g/L，磷酸氫二鉀1g/L。

5.根據權利要求3或4所述的一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，步驟B中所述無機鹽培養基包括以下組分：磷酸氫二鉀1g/L，磷酸二氫鉀1g/L，硫酸銨1g/L，七水硫酸鎂0.2g/L，氯化鈉0.1g/L，二水氯化鈣0.02g/L，七水硫酸鐵0.01g/L，酵母膏0.25g/L。

6.根據權利要求5所述的一種利用微生物轉化制備β-豬去氧膽酸的方法，其特征在于，步驟B中所述的α-豬去氧膽酸及β-氧化抑制劑 2,2’-Bipyridy事先溶解于乙醇中，其中α-豬去氧膽酸的濃度為0.1%-1.0%，β-氧化抑制劑 2,2’-Bipyridy的濃度為0.01%。