[發(fā)明專(zhuān)利]與SARS-CoV-2 RBD結(jié)合的羊駝源納米抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011037584.1
• 申請(qǐng)日: 2020-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114249820B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金騰川;馬歡;曾威紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/10
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本公開(kāi)涉及與SARS?CoV?2?RBD結(jié)合的羊駝源抗體或其抗原結(jié)合片段，具體涉及能以高親和力結(jié)合新冠病毒(SARS?CoV?2)受體結(jié)合區(qū)域(RBD)的羊駝源納米抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠用于預(yù)防、治療和/或診斷SARS?CoV?2感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用于治療和診斷用的抗SARS-CoV-2?RBD的納米抗體序列。

背景技術(shù)

SARS-CoV-2屬于冠狀病毒，其導(dǎo)致的肺炎稱(chēng)為COVID-19。SARS-CoV-2通過(guò)其表面突刺蛋白(spike)的受體結(jié)合區(qū)域(RBD)與上皮細(xì)胞表面的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞，完成侵染。

從康復(fù)患者體內(nèi)分離的全人源抗體被證實(shí)具有很好的抗病毒作用，但這些都是傳統(tǒng)的單克隆抗體，由2條重鏈和2條輕鏈組成。具有分子量大，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，不易加工改造等局限性。

在駱駝科動(dòng)物體內(nèi)存在一種天然缺失輕鏈的抗體，即重鏈抗體，其可變區(qū)僅由重鏈組成，該可變區(qū)簡(jiǎn)寫(xiě)為VHH，該可變區(qū)蛋白直徑小于10納米，因此又被稱(chēng)為納米抗體。納米抗體具有分子量小、穿透性強(qiáng)、易于表達(dá)、易于基因改造以及易于結(jié)合多個(gè)表位等優(yōu)點(diǎn)。

目前尚無(wú)抗SARS-CoV-2?RBD的羊駝源天然納米抗體獲批用于治療COVID19。

發(fā)明內(nèi)容

本公開(kāi)提供了能以高親和力結(jié)合新冠病毒(SARS-CoV-2)受體結(jié)合區(qū)域(RBD)的羊駝源重鏈抗體可變區(qū)序列(VHH)，該可變區(qū)序列又稱(chēng)為納米抗體，其能夠用于預(yù)防、治療和/或診斷SARS-CoV-2感染。

發(fā)明人采用體外重組表達(dá)的SARS-CoV-2?RBD蛋白對(duì)2頭小羊駝進(jìn)行3次免疫，然后分離出外周血淋巴細(xì)胞并抽提細(xì)胞的總RNA，隨后反轉(zhuǎn)錄為cDNA。再以此cDNA為模板，用特異引物擴(kuò)增出納米抗體序列。我們分離獲得7株納米抗體。分別命名為aRBD-2、aRBD-3、aRBD-5、aRBD-7、aRBD-41、aRBD-42和aRBD-54，其氨基酸序列分別如下：

aRBD-2的氨基酸序列：

aRBD-3的氨基酸序列：

aRBD-5的氨基酸序列：

aRBD-7的氨基酸序列：

aRBD-41的氨基酸序列：

aRBD-42的氨基酸序列：

aRBD-54的氨基酸序列：

所述7株納米抗體的3個(gè)抗原互補(bǔ)決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)如劃線部分所示，具體地：

aRBD-2：

CDR1：GRTYTM(SEQ?ID?NO：1)

CDR2：EFVAAMRWSDTD(SEQ?ID?NO：2)

CDR3：AGEAWLARSTHHYDY(SEQ?ID?NO：3)

aRBD-3：

CDR1：GLTLDYYAI(SEQ?ID?NO：4)

CDR2：EGVSCISHPGGSTN(SEQ?ID?NO：5)