[發明專利]一種腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物及其制備與應用

在審

• 申請號: 202011035067.0
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112076321A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 張黎明;鄧立志;班曉華;段小慧
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/64;A61K47/54;A61K31/4745;A61K31/409;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物，其特征在于：由親水的絲膠蛋白、疏水的喜樹堿和具有腫瘤靶向特性的生物素組成，每相鄰的兩個部分中間由二硫鍵連接；所述的絲膠蛋白、喜樹堿和生物素的質量比為10～200：1～2：1～2，平均每一百個氨基酸單元二硫鍵含量在10％～30％。

2.權利要求1所述的腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1.胱胺化絲膠蛋白衍生物的制備：將干燥的絲膠蛋白粉末分散于超干DMSO溶劑中，攪拌至充分溶解，溶液澄清透亮，加入活化劑CDI活化，加入去離子水，猝滅沒有反應的CDI；加入胱胺水溶液，繼續反應，反應結束在純水中透析除去有機溶劑和水溶性雜質，冷凍干燥得到胱胺化絲膠蛋白衍生物；

S2.含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物的制備：將喜樹堿和酰氯化試劑溶于干燥的良溶劑中，惰性氣體氛圍下，加入催化劑DMAP活化，然后加入雙(2-羥乙基)二硫醚反應，洗滌，純化，重結晶，得到含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物；

S3.含喜樹堿和生物素基團的腫瘤靶向絲膠蛋白衍生物的制備：首先活化S2得到的含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物，然后加入S1得到的胱胺化絲膠蛋白衍生物，得到含喜樹堿基團的絲膠蛋白衍生物，然后與活化的生物素反應，得到含喜樹堿和生物素基團的腫瘤靶向絲膠蛋白衍生物，即為所述的腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

步驟S1中所述的絲膠蛋白的分子量控制在3萬～4萬Da；

步驟S1中所述的CDI的用量為絲膠蛋白粉末質量的0.2～1倍，所述的胱胺的用量為絲膠蛋白粉末質量的0.5～2倍；

步驟S1中所述的活化的時間為12～48h；

步驟S1中所述的繼續反應的時間為24h；

步驟S1中所述的透析是指用截留分子量為3500～10000Da的透析袋進行透析；

步驟S1中，加料條件為4～10℃。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

步驟S2中所述的酰氯化試劑為三光氣或二氯亞砜，用量為喜樹堿摩爾分數的30％～70％；

步驟S2中所述的良溶劑為甲苯或二氯甲烷；

步驟S2中所述的洗滌的具體操作為：用0.1mol/L的鹽酸洗滌三到五次，飽和氯化鈉溶液洗滌一到兩次，蒸餾水洗滌三到五次；

步驟S2中所述的純化的具體操作為：分離有機相，用無水硫酸鎂干燥3～4小時，減壓蒸餾除去有機溶劑，過硅膠柱純化；

步驟S2中所述的重結晶的具體操作為：用氯仿-甲醇混合溶劑重結晶。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

步驟S3中所述的含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物的用量為胱胺化絲膠蛋白衍生物質量的1％～10％，活化含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物選用活化劑CDI，CDI的用量為含二硫鍵基團的喜樹堿衍生物摩爾分數的5％～20％；

步驟S3中所述的反應的時間為12～48h；

步驟S3中所述的生物素的用量為含喜樹堿基團的絲膠蛋白衍生物質量的1％～10％；

步驟S3中活化生物素選用EDC·HCl和NHS。

6.權利要求1所述的腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物在作為抗腫瘤藥物載體上的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：

所述的藥物載體為納米藥物載體，進一步為膠束、微乳、微球和納米粒子中的一種或兩種以上組合。

8.一種腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥納米粒子的制備方法，其特征在于：

將權利要求1所述的腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥衍生物的DMSO溶液轉移至透析袋中，在水中透析，過濾，得到腫瘤靶向的氧化還原敏感絲膠蛋白前藥納米粒子。