[發明專利]一種通過評估外周血免疫情況分析乙肝肝硬化情況的方法

在審

• 申請號: 202011032254.3
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112176022A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 武曉麗;楊涵;賈正虎;魏道河;張越;張心慧;王健
• 申請（專利權）人: 天津尤金生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N33/68;G01N33/576
• 代理公司: 天津展譽專利代理有限公司 12221
• 代理人: 陳欣

本發明涉及一種利用乙肝肝硬化患者和正常人外周血內γδT細胞的數量和表型分布差異評估外周血的免疫情況并利用此數據提供乙肝肝硬化發病情況信息的方法，其特征包括：(A)在外周血免疫細胞中分析γδT細胞占淋巴細胞(lymphocytes)比例和該細胞絕對數量的階段；(B)檢測外周血γδT細胞激活程度，殺傷能力等，并分析乙肝肝硬化患者和正常人的外周血內免疫細胞分布情況的階段；(C)在乙肝肝硬化和正常人當中，為判定肝硬化發病情況，而在患者及正常人兩個組群中辨別其有意義的標記結果值顯示出統計學上的顯著性和差異的組合的階段；以及(D)分析乙肝肝硬化患者外周γδT細胞比例與疾病進展階段相關性。

技術領域

本發明涉及一種方法，通過測量和診斷乙肝肝硬化患者和正常人的外周血內γδT細胞的數量和表型分布差異，找出兩個群組之間顯示出明顯差距的標記，分析乙肝肝硬化患者外周血γδT細胞比例和乙型肝炎肝硬化發病進程的相關性，并提供利用外周血鑒定乙型肝炎肝硬化發病進程的相關標準。

背景技術

乙型肝炎病毒(HBV)感染是多種肝病的主要危險因素，乙型肝炎肝硬化是乙型肝炎肝硬化發展的結果。肝硬化必須依靠病理診斷、超聲、腹腔鏡檢和CT等檢查，但是這些檢測手段在疾病發生早期的診斷中作用有限。近年來，隨著免疫治療的的快速發展，免疫診斷作為一種新興的診斷技術，也成為幫助臨床查找病因、了解病情進展的重要方法。

越來越多的證據表明，乙型肝炎肝硬化患者的肝臟中發生免疫失調。這些變化包括肝臟中炎性環境的惡化，表現為浸潤的非病毒特異性白細胞以及偏斜的細胞因子和趨化因子譜。炎性白細胞浸潤肝臟在確定HBV發病和發展中起重要作用。肝臟是具有大量固有免疫細胞的器官，包括天然殺傷(NK)細胞，天然殺傷T(NKT)和γδT細胞。γδT細胞是一種重要的免疫細胞類型，根據T細胞受體鏈的表達可分為Vδ1和Vδ2γδT細胞兩種亞型。γδT細胞亞群可直接識別在腫瘤細胞或病原體感染細胞表面表達的分子，而不是由專業抗原呈遞細胞加工的肽。通常，γδT細胞已被賦予針對造血和實體瘤以及微生物感染的保護作用。有關人類病毒感染中γδT細胞的可用數據最初是從病毒感染研究中獲得的，認為γδT細胞反應可實現初始控制和控制，有效發展適應性免疫反應。

除肝臟內部，血樣里也包括幾乎大部分的免疫細胞群及其亞型免疫細胞，研究外周血γδT細胞免疫活化和遷移狀態對揭示CHB發病機制和進程具有重要意義。CD38是一種表達在早期T細胞表面的糖蛋白，成熟以后消失，但是T細胞活化后又重新出現；靜止的T淋巴細胞一般不表達CD69，在受到某些刺激后T淋巴細胞表面就合成和表達一些新的糖蛋白，其中最早表達的是CD69。CD38和CD69作為T細胞免疫活化的標志，在許多急性或慢性感染中均會表達升高，如人類免疫缺陷病毒(HIV)、EB病毒(EBV)等感染。同時，淋巴細胞(包括T細胞)的遷移不僅取決于各種粘附分子的聯合作用，還受趨化因子與其受體之間相互作用的控制。細胞表面的趨化因子受體CCRs、CXCRs與相應配體結合后能夠促進細胞的遷移、浸潤。循環中的T細胞響應趨化因子的活化而遷移，這些趨化因子在激活正常T細胞表達和分泌，如CXCR 3和CXCR4。

因此本發明針對外周血免疫細胞中γδT細胞的數量和表型分布差異，其中包括在外周血免疫細胞中分析γδT細胞占淋巴細胞比例和該細胞絕對數量，外周血γδT細胞激活程度，遷移能力，與正常人的外周血中γδT細胞數量和表型分布做對比，將顯示出統計學上的顯著性和差異的組合進行標記，分析出乙肝肝硬化患者外周γδT細胞與乙肝肝硬化疾病進程的相關性，建立利用外周血鑒定乙型肝炎肝硬化發病進程的相關標準。

發明內容

本發明的目的在于，為診斷乙肝肝硬化的發病情況，在外周血的γδT細胞當中找出乙肝肝硬化患者較正常人具有差異的標記。從而診斷個體免疫活性，提供相應的免疫治療方法。