[發明專利]低毒、高細胞攝取率的細胞示蹤劑、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 202011032195.X
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112107698A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 張京鐘;安黎;余爽;劉巖;王飛飛;張麗星;石愛華
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: A61K49/12
• 分類號: A61K49/12;A61K49/18
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 孔凡玲

1.一種低毒、高細胞攝取率的細胞示蹤劑，其特征在于，該細胞示蹤劑為PAA和PEG包覆的超小超順磁氧化鐵納米顆粒，該細胞示蹤劑通過熱分解法合成超小超順磁氧化鐵納米顆粒后，再依次包覆PAA和PEG得到。

2.根據權利要求1所述的低毒、高細胞攝取率的細胞示蹤劑，其特征在于，所述低毒、高細胞攝取率的細胞示蹤劑的制備方法包括以下步驟：

1)熱分解法制備超小超順磁氧化鐵納米顆粒USPIO；

2)制備PAA包覆的超小超順磁氧化鐵納米顆粒USPIO-PAA：

2-1)將PAA加入三口圓底燒瓶中，再加入二甘醇；

2-2)將三口圓底燒瓶固定在油浴鍋中，油浴鍋中加入硅油沒過三口圓底燒瓶中的液面，油浴鍋置于磁力攪拌加熱器上，三口圓底燒瓶中依次裝入磁力攪拌子、球形冷凝管、溫度計，構成加熱冷凝回流裝置；

2-3)向三口圓底燒瓶中通入氬氣后，升溫，等待溶液完全變澄清；

2-4)將步驟2-1)中得到的溶液用量筒取一半，將量取的分散液用膠頭滴管重新滴加到三口圓底燒瓶中；

2-5)加熱升溫，再保溫，關閉磁力攪拌加熱器的加熱電源，保留磁力攪拌，自然冷卻至室溫；

2-6)向冷卻后的反應溶液中加入乙酸乙酯將納米顆粒沉淀出來，然后離心，去除上清，得到沉淀；

2-7)將沉淀物分散在乙醇中，再加入乙酸乙酯將納米顆粒沉淀出來，然后離心，去除上清，得到沉淀。

2-8)重復步驟7)一次，最終得到的沉淀即為超小超順磁氧化鐵納米顆粒：USPIO-PAA，使用超純水分散，保存；

3)制備PAA和PEG包覆的超小超順磁氧化鐵納米顆粒USPIO-PAA/PEG：

3-1)取步驟2-8)制得的USPIO-PAA超純水分散液，向其中加入EDC和NHS，將得到的混合物在室溫下磁力攪拌；再將單氨基聚乙二醇溶于超純水中，滴加到該混合物中，再磁力攪拌；

3-2)將步驟3-1)得到的反應溶液轉移至透析袋中，放于超純水中透析，期間每24h更換超純水；

3-3)將透析袋中的液體轉移到超濾管中，離心；

3-4)去掉濾下的液體，在超濾管中加入超純水，再離心；

3-5)重復步驟3-4)2次，最后超濾管中截留的固體物質即為USPIO-PAA/PEG，使用超純水重懸后，保存。

3.根據權利要求2所述的低毒、高細胞攝取率的細胞示蹤劑，其特征在于，所述步驟1)具體包括：

1-1)將乙酰丙酮鐵和三甘醇混合均勻后加入到三口圓底燒瓶中，將三口圓底燒瓶固定在油浴鍋中，油浴鍋中加入硅油沒過三口圓底燒瓶中的液面，油浴鍋置于磁力攪拌加熱器上，三口圓底燒瓶中依次裝入磁力攪拌子、球形冷凝管、溫度計，構成加熱冷凝回流裝置；

1-2)在磁力攪拌下，向三口圓底燒瓶中通入氬氣后，加熱，再保溫；

1-3)繼續加熱，保溫回流，之后關閉磁力攪拌加熱器的加熱電源，保留磁力攪拌，自然冷卻至室溫；

1-4)向冷卻后的反應溶液中加入無水乙醇后混勻，再加入乙酸乙酯將反應液中的納米顆粒沉淀出來，然后離心，去除上清液，得到沉淀物；

1-5)將沉淀物分散在乙醇中，再用乙酸乙酯將納米顆粒沉淀出來，離心，去除上清，得到沉淀物；

1-6)重復步驟1-5)1次，最后得到的沉淀物即為超小超順磁氧化鐵納米顆粒：USPIO，用無水乙醇重懸，保存。