[發明專利]基于納米纖維素的細胞生長因子緩釋各向異性支架構建方法和應用

有效

• 申請號: 202011027301.5
• 申請日: 2020-09-26
• 公開（公告）號: CN112138215B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 劉俊;程璐;史逸飛;盧雪初;于素潔;焦海鑫;王錢錢;孫建中
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/50;A61L27/20;A61L27/22;C08J5/18;C08J3/075;C08L1/02
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 李嘉寧

1.一種基于納米纖維素的細胞生長因子緩釋各向異性支架的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將云杉溶解漿纖維1千克分散于30升無菌水中攪拌分散均勻，加入50-100克氫氧化鈉，20-40毫升30%過氧化氫，攪拌均勻，120℃高壓滅菌60分鐘；

（2）將步驟（1）中的紙漿纖維用無菌水過濾清洗至濾液pH中性；

（3）將步驟（2）中清洗干凈的紙漿纖維分散在50升無菌水中攪拌，加入10-15克2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基、50-100克溴化鈉、5-10L 10%次氯酸鈉，調節并保持pH至10.5，室溫下攪拌反應12-24小時，1.0M HCl調節體系pH至7.0；300目尼龍網過濾，使用無菌水清洗直至濾液電導率低于5 μS/cm；將清洗干凈的紙漿纖維分散在30-50升無菌水中攪拌均勻，分別以500 bar和1500 bar的壓力通過高壓均質機，制取高純納米纖維素水凝膠；

（4）取適量步驟（3）制得的納米纖維素，使用無菌水稀釋至濃度為0.1%，倒入裝載有0.22微米孔徑PVDF濾膜的真空抽濾器；真空抽濾12-24小時，收集濾餅，上層覆蓋PVDF濾膜，雙面墊襯3層吸水濾紙；轉移至熱壓干燥機，在80℃，2.3 bar壓力下，熱壓干燥20分鐘，紫外照射30分鐘，制得納米纖維素薄膜；

（5）將步驟（4）中制得納米纖維素薄膜浸入溶解有500-1000 ng/mL成纖細胞生長因子以及20-100 U/mL復合纖維素酶的溶液5-10mL中，4℃原位吸附潤脹，同步形成具有各向異性結構的三維立體支架；

（6）將步驟（5）中制得載有細胞生長因子和纖維素酶的納米纖維素水凝膠支架用無菌水沖洗移除表面殘余生長因子和纖維素酶，根據需要切割成不同形狀尺寸，-50℃，0.1mbar真空度下，冷凍干燥72小時，制得基于高電荷密度納米纖維素的細胞生長因子緩釋支架。

2.權利要求1所述構建方法制得的基于納米纖維素的細胞生長因子緩釋各向異性支架。

3.權利要求2所述的基于納米纖維素的細胞生長因子緩釋各向異性支架在制備組織工程材料中的應用。