[發明專利]一種體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法

有效

• 申請號: 202011024126.4
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112143694B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 陳志釗;何賢櫻;李志強;張志堅;王華倩;楊靜茹;紀美琪;范凱翔;陳新鑫;王曉東;陳曌;宮劍平
• 申請（專利權）人: 廣州白云山花城藥業有限公司;廣東工業大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12Q1/02;C08J3/24;C08L5/04;C08L89/00
• 代理公司: 佛山市禾才知識產權代理有限公司 44379
• 代理人: 劉羽波;資凱亮

1.一種體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將海藻酸鈉溶液和/或明膠溶液混合均勻，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液以及N-羥基琥珀酰亞胺溶液，混合攪拌均勻，得到混合液A；

（2）加入霍亂毒素 B 亞單位溶液，攪拌均勻后得到混合液B，將混合液B進行透析，經過凍干后分散在生理鹽水中，得到霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉溶液或霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉-明膠溶液，所述霍亂毒素 B 亞單位溶液的濃度為1～4mg/mL，所述霍亂毒素 B亞單位溶液與海藻酸鈉溶液或海藻酸鈉-明膠溶液的體積比為1:4；

（3）在氯化鈣溶液的液面上方將步驟（2）制得的霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉溶液或霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉-明膠溶液滴加至氯化鈣溶液中，同時進行攪拌，待滴加完畢后繼續進行攪拌，取出凝珠，經洗滌和凍干后得到三維細胞篩藥支架；

（4）將三維細胞篩藥支架經過消毒后風干，將三維細胞篩藥支架浸泡于成骨細胞懸液中，加入培養基于培養皿后進行成骨細胞培養，得到體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架。

2.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，在氯化鈣溶液的液面上方15～20cm處將所述步驟（2）制得的霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉溶液或霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉-明膠溶液滴加至氯化鈣溶液中。

3.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，在氯化鈣溶液的液面上方將所述步驟（2）制得的霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉溶液或霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉-明膠溶液滴加至氯化鈣溶液中的滴加速度為1～1.5mL/min。

4.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，將所述步驟（2）制得的霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉溶液或霍亂毒素 B 亞單位-海藻酸鈉-明膠溶液滴加至氯化鈣溶液中，同時進行攪拌的攪拌速度為80～120r/min；

待滴加完畢后繼續進行攪拌的攪拌速度為180～220r/min，攪拌時間為8～12min。

5.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述海藻酸鈉溶液的濃度為15～30mg/mL，所述明膠溶液的濃度為5～20mg/mL。

6.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述混合液A中的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的濃度為5～10mg/mL，所述混合液A中的N-羥基琥珀酰亞胺的濃度為2～5mg/mL。

7.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，氯化鈣溶液的濃度為15～30mg/mL。

8.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述海藻酸鈉溶液與明膠溶液的混合體積比為100:0～25:75。

9.根據權利要求1所述的體外骨質疏松藥物的三維細胞篩藥支架的制備方法，其特征在于，所述成骨細胞懸液的細胞密度為1×10⁶～1×10⁷個/mL。