[發明專利]一種檢測體內精神藥物及其代謝物的方法和應用

有效

• 申請號: 202011023778.6
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112305140B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 孫秀佳;張晨;李春波;王麗華;陳艷;劉紅梅;蔣平;任娟娟
• 申請（專利權）人: 上海市精神衛生中心（上海市心理咨詢培訓中心）
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

1.一種檢測人血或頭發中精神疾病類藥物及其代謝物的方法，其特征在于，所述方法為采用超高效液相色譜-紫外檢測法，包括以下步驟：

所述精神疾病類藥物及其代謝物包括奧氮平、9-OH利培酮、氯氮平、去甲氯氮平、利培酮、喹硫平、氯丙嗪、米氮平、氨磺必利、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑以及帕羅西汀；

S1色譜條件：（1）色譜柱：C18色譜柱；（2）流動相：S1所述的色譜條件中：流動相：A相為0.05v/v%甲酸-水溶液；B相為0.05v/v%甲酸-甲醇溶液；（3）紫外檢測器為VWD或DAD檢測器，所述紫外檢測器的檢測波長為254nm、285nm或全波長；（4）流動相流速為?0.1~0.3mL/min；（5）柱溫為35~45℃；（6）供試品溶液和混合標準品溶液進樣量均為1.0～20.0μL；

S2工作溶液的配制：

S21內標溶液的制備包括：精密稱定1~30mg卡馬西平標準品，先用1~30mL甲醇溶解，再用40~70%v/v甲醇-水溶液定容，配制成濃度為0.1~0.5mg/mL的卡馬西平儲備溶液，再用40~70%v/v甲醇-水溶液稀釋至1~5μg/mL，即得內標溶液；

S22混合標準品溶液的制備包括：

S221：分別精密稱定各精神類疾病藥物標準品奧氮平、9-OH利培酮、氯氮平、去甲氯氮平、利培酮、富馬酸喹硫平、鹽酸氯丙嗪、米氮平、氨磺必利、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑、鹽酸帕羅西汀1~30mg，先用1~30mL溶劑溶解后，再用40~70%v/v甲醇-水溶液定容，配制成濃度為0.1~0.5mg/mL的混標母液；

S222：將上述混標母液用40~70%v/v甲醇-水溶液進行稀釋，配制成濃度為5~50μg/mL的標準溶液；

S223：精密吸取上述標準溶液10~30μL至6~10?mL離心管中，加入10~40μL?步驟S21制備的內標溶液，氮氣吹干后加入400~1000μL空白血清，第一次渦旋0.5~2min，然后加入100-400μL濃度為1~3?mol/L的氫氧化鈉水溶液以及甲基叔丁基醚2~7?mL，第二次渦旋2~5?min，再離心4~10min；

S224：取離心后的上清液氮氣吹干后加入60~100μL?50%v/v甲醇-水溶液復溶，渦旋1~5min，即得；

S23供試品溶液的制備包括：

S231或S232步驟，其中，

S231人血供試品的制備包括以下步驟：S2311：取10~40μL上述S21制備的內標溶液氮氣吹干后與400~1000μL融化后的待測冷凍人血清或血漿樣品混合至7~10mL離心管中，第一次渦旋0.5~2min，加入100~400μL濃度為1~3?mol/L的氫氧化鈉水溶液，以及甲基叔丁基醚2~7mL，再進行第二次渦旋2~5min；S2312：將渦旋后離心管以速度為2500~5000轉/分離心4~10min，取離心后的上清液氮氣吹干后加入60~100μL?40~70%v/v甲醇水溶液復溶，渦旋0.5~2min，即得；

S232頭發供試品的制備包括以下步驟：S2321：取待測頭發用丙酮、水依次清洗，干燥后剪碎，取10~40μL上述S21制備的內標溶液氮氣吹干后與10~50mg待測頭發樣品混合至7~10mL離心管中，加入100-800μL濃度為1~3?mol/L的氫氧化鈉水溶液，第一次渦旋0.5~5min，超聲1~4h，以及甲基叔丁基醚2~7mL，再進行第二次渦旋2~5min；S2322：將渦旋后離心管以速度為2500~5000轉/分離心4~10min，取離心后的上清液氮氣吹干后加入60~100μL?40~70%v/v甲醇水溶液復溶，渦旋0.5~2min，即得；

S3測定法：將混合標準品溶液和供試品溶液分別注入超高效液相色譜儀，采用梯度洗脫程序，得到色譜圖，獲得所述精神疾病類藥物及其代謝物保留時間t_R，即得，所述的梯度洗脫程序為：0min?5％v/v?B、3min?15%v/v?B、10min?20%v/v?B、20min?30%v/v?B、35min40%v/v?B、40min?50%v/v?B、45min?70%v/v?B、48min?95%v/v?B、52min?95%v/v?B、52.1min5%v/v?B、70min?5%v/v?B。