[發明專利]一種穩定的脂質體顆粒及其在免疫比濁檢測中的應用

在審

• 申請號: 202011023277.8
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112180079A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 房君江;宋仁杰
• 申請（專利權）人: 上海?？瞪锟萍加邢薰?/a>
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 上海段和段律師事務所 31334
• 代理人: 李慧;郭國中

1.一種用于免疫比濁法包被載體的脂質體納米顆粒，其特征在于，所述脂質體納米顆粒為球形、且平均粒徑50-250nm的脂質雙層結構，所述脂質體納米顆粒的密度為1.0-1.03g/cm^3。

2.一種根據權利要求1所述的用于免疫比濁法包被載體的脂質體納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將成膜材料和水攪拌混合后，改變溫度和壓力，使得成膜材料在水體中有效分散，并與水體結合形成大脂質體；

S2、將步驟S1得到的溶液通過加壓裝置加壓然后通過一個孔徑為50-200nm的膜后，得到含脂質體顆粒的溶液；

S3、將步驟S2所得溶液進行離心，去除上清液，加入緩沖液；

S4、在步驟S3所得溶液中加入季銨化合物，室溫攪拌，使得脂質體顆粒帶電荷；

S5、將步驟S4處理后的溶液離心，即制得所述脂質體納米顆粒。

3.根據權利要求2所述的用于免疫比濁法包被載體的脂質體納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述季銨化合物的化學通式為NR₁R₂R₃R₄-X，其中R₁和R₂各自獨立地為含有1至3個碳原子的短鏈烷基，R₃為氫或甲基或含有10至24個碳原子的烷基，R為含有10至20個碳原子的烴基，X為本身無毒的、藥學上可接受的陰離子。

4.根據權利要求3所述的用于免疫比濁法包被載體的脂質體納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述季銨化合物為二甲基雙十八烷基銨、二甲基雙十八烯基銨、1,2-二油?；?3-三甲基銨丙烷、1,2-二肉豆蔻?；?3-三甲基銨丙烷、1,2-二棕櫚酰基-3-三甲基銨丙烷、1,2-二硬脂酰基-3-三甲基銨丙烷、二油?；?3-二甲基銨丙烷、N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨、十八烯酰氧基(乙基-2-十七烯基-3-羥基乙基)咪唑啉鎓、1,2-二油烯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽堿和3-十四烷基氨基-叔丁基-N-十四烷基丙脒(二C14-脒)中的至少一種。

5.根據權利要求2所述的用于免疫比濁法包被載體的脂質體納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述成膜材料為天然磷脂或者合成磷脂；所述緩沖液為堿性緩沖液。

6.一種抗體致敏顆粒，其特征在于，由權利要求1所述的脂質體納米顆粒表面包被結合抗體而制成；所述包被的抗體包括羊抗、兔抗、鼠抗中的一種單克隆或多克隆抗體。

7.一種根據權利要求6所述的抗體致敏顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A1、將脂質體納米顆粒加入緩沖液中，再加入抗氧化劑超聲分散，離心后去上清液；

A2、將步驟A1處理后獲得的沉淀用緩沖液溶劑懸浮，超聲后，加入螯合劑、活化劑，室溫攪拌后離心，所得沉淀再用緩沖液懸浮并超聲、離心；

A3、將步驟A2處理后所得沉淀再用緩沖液懸浮并超聲，然后加入抗體，離心；

A4、將步驟A3處理后獲得的沉淀用緩沖液懸浮、超聲，然后離心；

A5、將步驟A4處理后獲得的沉淀用稀釋液懸浮，再加入蛋白穩定劑，超聲后即得抗體致敏顆粒。

8.根據權利要求7所述的抗體致敏顆粒的制備方法，其特征在于，所述抗氧化劑選自生育酚、生育酚衍生物、α生育酚、乙酸生育酚酯、琥珀酸生育酚酯、抗壞血酸、抗壞血酸衍生物、四己基癸基酯、丁羥甲苯、丁羥茴醚中的至少一種；

所述螯合劑的結構通式為An-L-Ch(R)n，其中An為疏水性膜締合基團；L為連接到Ch的環上原子上的連接基部分，并且可在可生物降解鍵處斷開；Ch為攜帶一個或多個親水性或定位基團R的大環螯合劑部分，并且n為0或正整數；

所述活化劑選自EDC、EDC/(sulfo)NHS、戊二醛、CDI、對甲苯磺酰氯、溴化氰、DSC、雙環氧基化合物、硼氫化氰中的一種或多種。