[發(fā)明專利]一種冷凍保護(hù)液及刺參精子超低溫冷凍保存方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011022462.5 | 申請(qǐng)日： | 2020-09-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112075415B | 公開（公告）日： | 2021-08-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張立斌;許帥;劉石林;林承剛;孫景春;孫麗娜;楊紅生 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院海洋研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01N1/02 | 分類號(hào)： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎 |
| 地址： | 266071 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 冷凍 保護(hù) 刺參 精子 超低溫 保存 方法 | ||
1.一種冷凍保護(hù)液，其特征在于：
所述冷凍保護(hù)液由自然海水、二甲基亞砜（DMSO）和葡萄糖組成，其中各自體積質(zhì)量比為85mL~90mL：10mL~15mL：1.98g；
所述冷凍保護(hù)液由自然海水和二甲基乙酰胺（DMA）組成，按體積比為80mL：20mL；
所述冷凍保護(hù)液用于冷凍保存刺參新鮮精液，冷凍保護(hù)液與刺參新鮮精液的體積比為1:7。
2.按權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)液，其特征在于：所述自然海水為用0.45μm濾膜過濾的自然海水；二甲基亞砜（DMSO）為純度≥99.97%的二甲基亞砜，二甲基乙酰胺（DMA）為純度≥99.97%的二甲基乙酰胺，DMSO和DMA都屬于非質(zhì)子高極性溶劑。
3.一種利用權(quán)利要求1所述的冷凍保護(hù)液的刺參精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于包括以下步驟
（1）精液獲取：取處于繁殖期的刺參獲得其精子，待用；
（2）精液與冷凍保存液混合：將刺參新鮮精液與冷凍保護(hù)液按1:7的體積比充分混合置于容器中；
（3）程序降溫：混合后置于程序降溫儀中，運(yùn)行降溫程序，降溫程序?yàn)?℃下平衡5min，以15℃/min的降溫速率降溫至-80℃，-80℃下平衡5分鐘，以20℃/min的降溫速率降溫至-180℃，平衡5分鐘后取出，即實(shí)現(xiàn)刺參精子超低溫冷凍保存。
4.按權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：將所述經(jīng)程序降溫后的精子容器放入液氮中長期保存。
5.按權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述冷凍保存刺參精子置于25℃水浴中解凍，輕輕搖動(dòng)使溫度均勻，約120S時(shí)待只剩少量固體立即取出，在空氣中繼續(xù)搖動(dòng)使其完全融化；吸取凍精加入到激活劑中混勻，使刺參原精稀釋總倍速達(dá)600倍，激活液配方是含5wt%胎牛血清的過濾自然海水。
6.按權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟（2）刺參新鮮精液為將收集的精子經(jīng)激活劑稀釋600倍，檢測(cè)精子收集活力大于90%的精子，待用。
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