[發明專利]釀造酵母Bei-29的健康營養型果酒的制備方法及檢測方法

在審

• 申請號: 202011019509.2
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112226376A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 陶永勝;張倩瑋
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/18
• 分類號: C12N1/18;C12N1/16;C12G1/02;C12G1/022;C12G1/04;C12G3/024;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;C12R1/865;C12R1/645
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 韓翎

1.一種釀造酵母Bei-29的健康營養型果酒的制備方法，其特征在于：包括以下操作步驟：

1)將優選膠紅酵母Bei-29進行活化培養；

2)將活化培養后的膠紅酵母Bei-29進行擴大培養；

3)將擴大培養后的膠紅酵母Bei-29與釀酒酵母進行混菌發酵。

2.根據權利要求1所述的一種釀造酵母Bei-29的健康營養型果酒的制備方法，其特征在于：所述步驟1)將膠紅酵母Bei-29進行活化培養：將優選膠紅酵母菌株Bei-29的甘油保藏液接種于5mL YPD培養基，接種濃度10％，28℃活化培養48h；

所述步驟2)將活化培養后的膠紅酵母Bei-29進行擴大培養：將步驟1)活化培養液以5％的濃度接種于100mL YPD培養基，28℃180rpm/min擴大培養72h；

所述步驟3)將擴大培養后的膠紅酵母Bei-29與釀酒酵母進行混菌發酵：取成熟的水果，低溫快速除梗破碎，在破碎的同時添加50mg/L SO₂，隨后添加20mg/L果膠酶，果醪4℃條件下冷浸漬24h后皮渣分離獲得葡萄汁(自流汁出汁率為45％，壓榨汁出汁率約20％)，添加1g/L膨潤土下膠澄清，澄清汁溫度回升至20℃，接種步驟2)膠紅酵母Bei-29的擴大培養液(10⁶cfu/mL)，48h后接種釀酒酵母(10⁶cfu/mL)，發酵溫度控制在20～25℃，若果汁含糖量不足，在發酵旺盛期添加蔗糖至目標酒度達11.5％vol，每天監測溫度和比重，待比重降至1.010時皮渣分離，繼續發酵至含糖量低于2g/L時，加入50mg/L SO₂終止發酵，轉澄清酒至干凈衛生的貯罐，滿罐密封貯藏。

3.根據權利要求2所述的一種添加釀造酵母Bei-29的果酒的制備方法，其特征在于：所述的水果含糖量≥150g/L，以葡萄糖計；含酸量≥4g/L，以酒石酸計。

4.根據權利要求1所述的一種釀造酵母Bei-29的健康營養型果酒的檢測方法：其特征在于：方法步驟為：

步驟1)發酵果酒中類胡蘿卜素的提取：取10mL果酒至15mL離心管，在4℃下8000r/min離心5min，去上清液，用0.9％的氯化鈉溶液在上述離心條件下清洗沉淀兩次，去上清液，在沉淀中加入10mL丙酮和5mL玻璃珠，利用細胞破碎儀破碎3min，取出離心管放于冰上冷卻30s，重復該操作3～5次，顯微鏡鏡檢至細胞完全破碎，4℃下10000r/min離心10min，取上層深色清液，用5mL丙酮清洗沉淀和玻璃珠，重復破碎后的離心操作至萃取完全，收集所有上層清液于15mL離心管，加入0.2g Tween-80，將萃取收集的上層溶液放入真空旋蒸儀中富集濃縮，低溫旋蒸至干燥，復溶于2mL無菌蒸餾水混勻，用0.22μm有機系針頭過濾復溶液即得類胡蘿卜素提取液，放于4℃冰箱備用，所有操作應在避光條件下完成；

步驟2)HPLC-DAD分析：將步驟1)類胡蘿卜素提取液進行HPLC-DAD分析，色譜分析條件：色譜柱為Welch Ultimate AQ-C18(5μm，4.6×250mm)；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；檢測器：二極管陣列檢測器；檢測波長：460nm；上樣量：20μL；流動相A為甲醇：純水：甲基叔丁基醚＝30：10：1；流動相B為甲醇:甲基叔丁基醚＝1：1，即得總類胡蘿卜素含量≥2.45±0.1mg/L；

步驟3)果酒中去甲類異戊二烯類香氣化合物含量的檢測：采用SPME-GC-MS技術，取8ml果酒于棕色頂空瓶，加入2.000g NaCl和20μg內標物2-辛醇，將頂空瓶置于島津A0C-6000上進行自動進樣操作，進樣口溫度220℃，離子源溫度220℃，質譜掃描范圍為30-350amu，掃描頻率0.02s/次，即得總降異戊二烯類香氣化合物含量≥39±5μg/L。

5.根據權利要求4所述的一種釀造酵母Bei-29的健康營養型果酒的檢測方法：其特征在于：所述的步驟3)中2-辛醇的濃度為0.016g/L。