[發明專利]南美番茄潛葉蛾SCAR引物及其應用

有效

• 申請號: 202011019496.9
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112143817B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 張桂芬;畢思言;張毅波;劉萬學;王玉生;郭建洋;楊安沛;冼曉青;萬方浩
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 尹超群

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及南美番茄潛葉蛾特異性SCAR引物及其應用。本發明的特異性引物只對南美番茄潛葉蛾具有擴增能力，擴增產物大小為397bp。對單粒卵及成蟲殘體亦有良好的檢測效果，本發明提高了南美番茄潛葉蛾檢測的準確性，節約了檢測時間，適宜以試劑盒的形式在進境植物檢疫、國內植物檢疫和田間防治中推廣。

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及南美番茄潛葉蛾特異性SCAR引物及其應用。

背景技術

南美番茄潛葉蛾Tuta absoluta(Meyrick)，別名番茄潛葉蛾、番茄潛麥蛾、番茄麥蛾，英文首選通用名稱the South American tomato leafminer，屬鱗翅目(Lepidoptera)麥蛾科(Gelechiidae)，原產于南美洲的秘魯，是一種世界性檢疫性入侵害蟲。南美番茄潛葉蛾寄主范圍廣泛，危害蔬菜(如番茄、茄子、甜椒、菜豆、菠菜等)、水果(如櫻桃番茄/圣女果、菇娘、人參果等)、糧食作物(如馬鈴薯)、糖料作物(如甜菜)、煙草以及雜草植物(如龍葵、田旋花等)等，且擴散迅速，嚴重發生時減產率極高，甚至毀種重播、絕產絕收。目前雖然南美番茄潛葉蛾僅在我國局部區域發生，卻已對保護地和露地番茄造成了嚴重危害，因此，加強對南美番茄潛葉蛾的檢測監測，是保障蔬菜和水果產業健康發展的首要前提。

南美番茄潛葉蛾為鉆蛀型昆蟲，常隱蔽發生，尤其在發生初期很難及早發現，傳統形態學鑒定方法的難度大，準確性低，加強檢疫和監測必需建立一套快速準確的分子檢測方法。目前國際上用于南美番茄潛葉蛾鑒定的方法主要有：1)形態特征鑒定；2)PCR技術等。但目前國內針對南美番茄潛葉蛾尚沒有標準的檢測方法。

RAPD和ITS、COI技術(以及SS-COI技術)曾用于鑒別南美番茄潛葉蛾及其近緣種。RAPD技術檢測是以基因組DNA為模板，以單條人工合成的隨機多態核苷酸序列為引物，在DNA聚合酶的催化下，進行PCR擴增，擴增產物經瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上根據多態性來判斷檢測結果。rDNA ITS技術和mtDNA COI技術檢測是利用通用型的引物，在DNA聚合酶的催化下，對目標DNA進行體外擴增，然后將PCR產物回收、純化、測序，根據序列比對和系統發育樹構建來判斷檢測結果。而靶標種特異性SCAR-PCR檢測技術是在RAPD技術的基礎上發展起來的特異序列擴增區域標記，是利用特異性的引物，根據預期DNA條帶的有無及大小來判斷檢測結果，無需測序和序列比對，具有靈敏度高、特異性強、快速、簡便且重現性好和穩定性強等優點。

發明內容

本發明的目的在于提供一對南美番茄潛葉蛾特異性SCAR引物。

本發明的再一目的在于提供南美番茄潛葉蛾特異性檢測方法。

本發明的再一目的在于提供南美番茄潛葉蛾檢測試劑盒。

根據本發明的具體實施方式的南美番茄潛葉蛾特異性SCAR引物，引物序列為：

TAZBF1：5′-ACGAAAACACACAGCGACAT-3′；

TAZBR1：5′-AACACACCTGCGAGAGAA-3′。

使用上述南美番茄潛葉蛾特異性SCAR引物擴增獲得南美番茄潛葉蛾特異性基因片段397bp，其核苷酸序列為：

acgaaaacac acagcgacat taattggcat agccattatt tcaagacttt atactatgca 60

aaaatatgtt tgcttcaacg ttcaatatcc caaatgtggg tcatagatca gagggaacag 120

tttcaaatgg gaatcgttct ccgcgcgctt aattgctgcc tctccggtgc agcgccgaga 180